摘　要　HPLC法测定郁福来胶囊中芦丁的含量, Inertsil ODS2315μm 150 ×416mm色谱

柱, SecurityGuard Guard Cartridge Kit保护柱,乙腈21 %甲酸( 19 ∶81)流动相,检测波长

360 nm,柱温30℃, 线性范围为01219～2119μg1mL

21 , r = 01998,平均回收率为9912% ,

RSD为1152%。

关键词　HPLC　郁福来胶囊　芦丁　含量测定

前言

郁福来胶囊是由藤黄科金丝桃属植物贯叶连翘经乙醇回流提取,减压回收乙醇至稠膏状,再经真空干燥制得的纯中药浸膏制剂,主治轻中度抑郁症。贯叶金丝桃中主要含有苯并二蒽酮类、蒽醌类(金丝桃素、伪金丝桃素等) 、黄酮类(芦丁、金丝桃苷、懈皮素等)及间苯三酚类(贯叶金丝桃素、加贯叶金丝桃素等)化合物〔1〕。过去大多数研究者认为金丝桃素是贯叶金丝桃抗抑郁的主要有效成分〔2, 3〕,但随着研究的进展,发现贯叶金丝桃抗抑郁作用是蒽醌类、黄酮类及间苯三酚类成分协同作用的结果(其中贯叶金丝桃素极不稳定,难以定量) 。本文建立贯叶金丝桃中黄酮类成分芦丁含量的高效液相色谱法测定方法,目前尚未见相关报道〔4, 5〕。

1　实验部分

1.1　仪器与试剂

HP21100高效液相色谱仪,配有紫外检测器和色谱数据处理工作站(美国惠普公司) ; CQ2250型超声波清洗仪。

芦丁对照品(中国药品生物制品检定所,批号:008029705) ;郁福来胶囊(解放军第102医院制剂中心生产) ;乙醇、甲酸为分析纯;乙腈为色谱纯。

1.2　方法与结果

1.2.1　色谱条件　色谱柱: Inertsil ODS2315μm 150×416mm; 保护柱: Security Guard Guard CartridgeKit;流动相:乙腈21%甲酸(19∶81) ;检测波长: 360nm,柱温: 30 ℃。

1.2.2　溶液的制备　系列对照品溶液:取105℃干燥至恒重的芦丁对照品约10mg, 精密称定, 为10195mg,置50 mL量瓶中,用75%乙醇溶解并稀释至刻度,得每1mL 含芦丁219μg的对照品贮备液。分别精密吸取1.0mL、2.0mL、5.0mL、8.0 mL 于10mL量瓶中,用75%乙醇定容,摇匀。

供试品溶液:取本胶囊内容物约013g,精密称定,置50mL量瓶中,加75%乙醇溶液40mL,超声处理30min, 冷却, 加75%乙醇溶液至刻度, 摇匀,0145μm微孔滤膜过滤。

阴性对照溶液:取当归,按本品的制备工艺制成不含贯叶金丝桃成分的颗粒,取该颗粒适量,按供试品溶液制备方法进行操作,制得阴性样品溶液。

1.2.3　系统适用性试验　分别吸取浓度为0.1095mg·mL21的对照品溶液、供试品溶液及阴性

对照溶液各10μL注入,按“11211”色谱条件记录色谱图(见图12A, B, C) ,按芦丁峰计算,理论塔板数为3000以上。在本色谱条件下,芦丁峰的测定无干扰,芦丁峰的保留时间约为1015 min,芦丁峰与邻近峰的分离度良好R > 115。

1.2.4　标准曲线及线性范围　分别准确吸取对照品溶液各10μL,进样。按“11211”色谱条件测定芦丁的峰面积。以进样量(μg)为横坐标,芦丁峰面积为纵坐标进行线性回归, 得回归方程: Y =1338145X - 13108 ( r = 019998 ) , 在01219 ～2119μg/mL范围内,芦丁峰面积值与进样量有良好的线性关系。

1.2.5　精密度试验　准确量取浓度为0.1095 mg·mL21的对照品溶液10μL,重复进样5次,芦丁峰峰面积的RSD为0.98%。

1.2.6　稳定性试验　准确量取新制供试品溶液10μL,按“1.2.1”色谱条件,分别于0h, 2h, 4h, 8h, 12h,注入, 测定芦丁的峰面积, 其峰面积的RSD =1.0% ,结果表明样品的供试品溶液在12 h内稳定。

1.2.7 　重复性试验　对同一批样品(批号030401) ,分别取样6份,按供试品溶液的制备方法进行制样,按“1.2.1”项下方法检测,该批样品的芦丁含量为3.2. mg·g21 , RSD为1.2%。

1.2.8　回收率试验　准确称取已知含量的样品(批号030401,含量: 3121 mg·g21 )共9份,每份约0.15 g, 分别加入0.95 mg ·mL21 对照品溶液1.6mL, 2mL, 2.4mL,每种浓度各3 份,按供试品溶液的制备方法进行制样, 准确量取10 μL 按“1.2.1”色谱条件进样测定, 3个浓度的均回收率分别为98.4% , 98.1% , 98.8%; RSD 分别为: 1.2%,1.1% , 1.1%。

1.2.9　样品测定　分别取不同批次郁福来胶囊各l0粒,称重,取出内容物,再称定空心胶囊,计算平均粒重。将胶囊内容物混匀,按“11212”溶液的制备方法,制备对照品溶液与供试品溶液。分别精密量取上述溶液各10μL, 注入液相色谱仪, 按“11211”条件检测,以标准曲线法计算样品中芦丁的含量。共测定4批样品(见表1) 。

2　讨论

2.1　供试品溶液的制备选取甲醇及75%乙醇2种溶剂进行考察;提取方法考察超声及回流两种提取方式。结果表明, 75%乙醇所提取的芦丁含量较甲醇更高,故采用75%乙醇作为样品供试液的提取溶剂;超声30min与回流1h效果相当,为实验简便,采用超声提取。

2.2　在流动相的选择上,分别采用甲醇2水、甲醇2磷酸、乙腈2水、乙腈2磷酸等多种条件,结果发现,乙腈21%甲酸作为流动相分离效果最理想。

2.3　本文建立用HPLC测定郁福来胶囊中芦丁含量的方法,方法快速、灵敏、准确,样品处理简便易行,该法适用于郁福来胶囊中芦丁含量的质量分析。

参考文献

1　殷志琦,叶文才,赵守训1贯叶连翘的化学成分研究〔J〕,中草药, 2001, 32 (6) : 487～488

2　Butterweck V,Wall A, L ieflander2Wulf U, et al 1 Effects of the total extract and fractions of Hypericum perforatum in an2 imal assays for antidep ressant activity 〔J 〕,Pharmaco2p sychiatry1 1997, 30 ( Supp l 2) : 1173　Calapai G, Crup i A, Firenzuoli F, et al 1 Effects of Hyperi2 cum perforatum on levels of 52hydroxytryp tamine, noradrena2 line and dopamine in the cortex , diencephalon and brain2 stem of the rat〔J〕1 J Pharm Pharmacol, 1999, 51 ( 6) : 723

～728

4　张博1 HPLC法测定贯叶连翘中贯叶金丝桃素含量〔J〕,中草药, 2001 , 32 (4) : 321～322

5　瞿发林,赵汉清,刘桂永等1郁福来胶囊中金丝桃素的含量测定及稳定性试验〔J〕, 中国药师, 2004, 7 (10) : 775～777

6           中华人民共和国药典委员会,中国药典2005版(一版) ,北京:化学工业出版社, 2005

Determ ina tion of rutin in Yufula i capsules by HPLC

L in Xiang　L iu Haifeng　L i Hui

( School of Chemical Engineering and Technology of SiChuan University, Chengdu 610065, China)

Abstract　HPLC was developed for determining Rutin in Yufulai cap sules on Inertsil ODS2315μm 150 ×416mm and Security Guard Guard Cartridge Kit column with acetonitrile21% formic acid (19∶81) mixture asmobile phase and ultraviolet detector at 360 nm1 The column temperature was 30℃1 The resultswere reported that Rutin had a good linearity in the range of 01219～2119μg/mL ( r = 01998) , The average recoveries of the method was 9912% with the relative standard deviation of 1152%1Thismethod was swift , exact and accurate, can be app lied in deter2 mining Rutin in Yufulai cap sules1.

Key words　HPLC　Yufulai cap sules　Rutin　Determine content