Fe3O4/TiO2纳米粒子亲和富集-MALDI-TOF-MS检测
磷酸化肽的研究
谭峰，张养军，王京兰，蔡耘，钱小红*
（军事医学科学院放射医学研究所，北京蛋白质组研究中心，
北京昌平区生命园路33号，102206）

    蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一，在生命活动中具有重要的调控作用。对磷酸化蛋白质的分析是蛋白质磷酸化研究非常关键的第一步，也是当前蛋白质组学研究的重要内容之一。由于细胞/组织内磷酸化蛋白质的含量非常少，以及在质谱分析时，非磷酸化肽段对磷酸化肽存在信号抑制作用，使得磷酸化蛋白质或磷酸化肽段的检测非常困难。对目标磷酸化肽段进行选择性富集，不仅可以增加可检测的磷酸化肽的绝对量，还能消除信号抑制效应，从而极大地提高磷酸化肽的检测灵敏度。
    固相金属亲和色谱是目前受到相当关注和应用较多的富集磷酸化肽的技术[1-4]。最近，二氧化钛作为一种新型的亲和色谱介质用于选择性富集磷酸化肽获得了极大得成功[5-7]。本文利用磁性的Fe3O4/TiO2纳米粒子作为亲和富集填料选择性富集微量磷酸化肽。利用该富集方法，结合高灵敏度的基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱技术，共检测到酪蛋白的7个磷酸化肽段，其中三个为多磷酸化位点肽段（1927.69 Da, 2719.90 Da 和3008.06 Da），对β酪蛋白的质量数为2061.6 Da的磷酸化肽段的检测限为20 fmol。该富集方法具有操作简单、选择性好、富集效率高等优点，在磷酸化蛋白质的分析中具有很好的应用前景。

参考文献
1. 王京兰，钱小红,分析化学, 2005, 33: 1029-1035
2. Wang J L, Zhang Y J, Jiang H, Cai Y, Qian X H, Proteomics, 2006, 6: 404-411
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4. Larsen M R, Thingholm T E, Jensen O N, Roepstorff P, Jørgensen T J D, Mol. Cell. Proteomics, 2005, 4: 873–886
5. Larsen M R, Thingholm T E, Jensen O N, Roepstorff P, Jørgensen T J D, Mol. Cell. Proteomics, 2005, 4: 873-886
6. Pinkse M W H, Uitto P M, Hilhorst M J, Ooms B, Heck A J R, Anal. Chem., 2004, 76: 3935-3943
7. Chen C T, Chen Y C, Anal. Chem., 2005, 77: 5912-5919