毛细管电泳免疫化学发光高灵敏检测人血清中肿瘤标志物
刘彦明a*，穆海贝a，陈永红b
（a. 信阳师范学院化学化工学院，河南 信阳464000；
b. 信阳市中心医院，河南 信阳464000）

    肿瘤标志物的灵敏检测对肿瘤的早期诊断和病情的判断极具临床意义。正常人血清中甲胎蛋白（AFP）含量很低，而肝癌患者血清中的AFP含量将会升高（>20 μg/L）。目前AFP的检测方法有放射免疫、酶联免疫、催化荧光光度法和免疫传感器等方法[1-4]。但这些方法操作费时，要求严格，灵敏度也有待提高，放射免疫分析还存在放射危害的问题。毛细管电泳免疫化学发光 (capillary electrophoresis immunoassay chemiluminescence, CEIACL) 分析具有毛细管电泳的高分离效率、免疫分析的高特异性及化学发光检测的高灵敏度的优点[5-7]。本文报道了人血清免疫反应后直接进样、毛细管电泳分离化学发光灵敏检测AFP的新方法，检测结果与医院使用的全自动微粒子化学发光仪检测结果吻合。
1 实验部分
1.1 仪器、试剂和材料 自行组装的毛细管电泳化学发光检测系统。AFP EIA试剂盒（瑞典康乃格诊断公司）；正常人及肝癌患者血清由信阳市中心医院提供。
1.2 免疫反应及样品制备
    采用非竞争性免疫模式：Ag(AFP) ＋ Ab*（过量）→Ab*-Ag ＋ Ab*。取试剂盒中的不同浓度的AFP溶液与Ab*溶液混合、孵化。人血清中AFP的免疫过程相同。
2 结果与讨论
2.1 标准甲胎蛋白的CEIACL检测
    将经过免疫反应的AFP样品溶液进样毛细管电泳分离化学发光检测，浓度为0和100 ng/mLAFP的结果分别见图1和图2。分别利用迁移时间和峰面积进行定性和定量分析。AFP的检出限为1.2×10－11 mol/L（S/N = 3）。

2.2 人血清中甲胎蛋白的高灵敏检测
    取正常人和肝癌患者血清，不经稀释进行免疫后直接进样毛细管电泳分离在线化学发光检测。图 3和图 4分别为正常人和肝癌患者血清免疫后得到的电泳图。可见，Ab*与Ab*-Ag在4 min内得到良好分离。正常人血清中AFP含量较低，而肝癌患者血清中的AFP含量明显升高。

   为验证方法的可靠性和准确性，将本文提出的CEIACL方法与医院检验使用的全自动微粒子化学发光仪Access IA system方法对正常人和肝癌病人血清进行测定比较。结果表明，CEIACL方法与Access IA system方法测定结果吻合。本研究一个崭新的特色就是初步展示了毛细管电泳免疫化学发光检测可为甲胎蛋白等肿瘤标志物的灵敏分析及疾病早期诊断提供一种新的简便方法。
参考文献
1.焦奎，张书圣. 酶联免疫分析技术及应用，北京：化学工业出版社，2004.
2.魏永峰，闫宏涛. 分析化学, 2000, 28(1): 99-101.
3.Wang, R.Y.; Lu, X. N.; Ma, W. Y. J. Chromatogr., B 2002, 779, 157-162.
4.Tsai, W. C.; Lin, I. C. Sensors Actuat. B 2005, 106, 455–460.
5.Wang J. H., Huang W. H., Liu Y. M., Cheng J. K., Anal. Chem., 2004, 76: 5393-5398.
6.王军华，刘彦明，程介克 等.高等学校化学学报，2004, 25(9): 1642-1644.
7.Wang J.N., Ren J.C., Electrophoresis, 2005, 26: 2402-2408.

Sensitive Chemiluminescence Detection of Cancer Marker Alpha-fetoprotein in Human Sera with Capillary Electrophoresis Immunoassay
LIU Yan-Ming a *, MU Hai-Bei a, CHEN Yong-Hong b
(a. College of Chemistry and Chemical Engineering, Xinyang Normal University, Xinyang 464000, China; b. Central Hospital of Xinyang City, Xinyang 464000, China)