重氮树脂化学键合毛细管涂层柱分析蛋白质
廖杰1，于冰2，丛海林2，刘虎威2*，曹维孝2
1 中国人民解放军总医院医学实验测试中心，北京 100853
2 北京大学化学与分子工程学院，北京，100871 Email: hwliu@pku.edu.cn

    毛细管电泳(CE)分离蛋白质等生物大分子能达到上百万的理论塔板数[1]。然而，由于毛细管内壁对蛋白质的吸附作用，实际的分离柱效很难达到理论预测的那样高。为了克服毛细管壁对蛋白质的吸附作用，人们采用各种方法：采用极端 pH值的缓冲溶液法；采用无机和有机添加剂的方法；对毛细管内壁进行改性。通过涂层来阻止蛋白质与毛细管壁的相互作用，以达到减小蛋白质吸附的目的。比较而言，毛细管内壁改性法最为有效[2]。因此，近年来，CE涂层柱技术得到了不断的发展，本文通过使用光敏性高分子的化学键合反应，对毛细管内壁进行改性，来分析四中碱性蛋白质。
实验部分
     重氮树脂全称是二苯胺-4-重氮硫酸盐-甲醛树脂，是由二苯胺重氮盐与多聚甲醛在酸性介质中加聚而成的[3]。它的分子量为 Mn 2.5 × 103 g/mol。未涂层的毛细管（48.5 cm×50 μm ID，河北永年锐沣公司）。HP3DCE。细胞色素C，溶菌酶，胰蛋白酶原，α-胰凝乳蛋白酶原A，均购自Sigma公司，配成 1 mg/ml 的混合样品，所用水为二次去离子水。
结果与讨论
     由于细胞色素C，溶菌酶，胰蛋白酶原，α-胰凝乳蛋白酶原A，都是碱性蛋白，所以，在弱酸性和中性条件下均带正电荷，和管壁之间有很强的亲和力。为了有效的分离这四种蛋白，我们用动态涂层法，对毛细管内壁进行了如下改性：用NaOH, H2O和重氮树脂溶液分别冲洗毛细管。而后，在室温下，用氢气吹干毛细管内壁（避光），再将毛细管在紫外灯下曝光。由于二苯胺重氮树脂是一种典型的光敏性高分子，在紫外光的照射下，重氮基团会很快分解放出氮气，主要生成苯基正离子中间体，进而与邻近基团发生亲核取代反应，形成共价键。所以，按照此方法形成的化学键合毛细管涂层柱提高了涂层的稳定性。更有利于电泳的分离。经过条件优化，我们得到了最佳的检测结果，如图１所示。电渗流得到了有效的抑制，四种碱性蛋白得到了很好的分离，且有很好的相对峰高和迁移时间的重现性。

参考文献：
[1] J. W. Jorgenson, K. D. Lukacs, Anal.Chem 1981, 53 (3): 129 8
[2] 寿崇琦，张志良，邢希学，康杰分，化学通报，2006, 1：41
[3] S.G. Cao, C. Zhao, W.X., Cao, Polym Int 1998, 45:142–146