rhSCF包含体的稀释法复性与离子交换色谱纯化
王骊丽，刘江峰，王超展，耿信笃
（西北大学现代分离科学研究所，现代分离科学陕西省重点实验室，西安 710069）

    目前，重组蛋白复性和分离纯化主要存在的问题仍然是复杂、失去活性、规模性、低回收率以及大量蛋白的丢失。这不仅制约了基因工程技术的进步，也是基因工程药物生产的主要成本之一。至今还没有一种复性程序适合所有蛋白质，以往在重组蛋白复性过程中，通常的策略是试图降低蛋白质的浓度，减少蛋白质的相互作用来抑制包含体的形成而促进蛋白质的复性。如添加低分子化合物，即通过破坏错误折叠中间体的稳定性，或增加折叠中间体和未折叠分子的可溶性来提高蛋白质的复性产率。因此，对某种蛋白质的复性必须反复实验，为了能有效地减少蛋白质之间的相互作用，提高活性蛋白的产量和蛋白质复性率，必须针对每一个蛋白建立一个独特的蛋白质折叠平台，来获得高浓度和高产率的蛋白药物。
     在大肠杆菌表达的重组人干细胞因子(rhSCF)包涵体已报道。与大多数表达于E.coli的真核蛋白一样，原核表达的rhSCF也是存在于E.coli的包含体组分。在这个工作中，将所获得的包涵体经洗涤、回收，并溶解于8mol/L-1脲溶液中，并对复性缓冲液的成分进行了优化，探讨了多种添加物对rhSCF复性效率的影响。然后进一步用稀释法复性和弱阴离子交换色谱(WAX)纯化。
     首先在优化分离纯化包涵体的基础上，对所用复性缓冲液进行了优化，结果当pH值为8.0（见图1）、脲浓度为0, 2 molL-1（见图2）、GSH/GSSG 为5:1（见图3）、精氨酸的浓度在0.5-0.6 molL-1（见图4）时，用稀释法复性可以获得高的质量回收率和活性回收率的hSCF蛋白。

    将优化条件下复性缓冲液对rhSCF进行稀释法复性，所获得的溶液经WAX（DEAE-Sepharose Fast Flow玻璃层析柱，100×12mmI.D.）分离和富集，其色谱结果见图5。最终，在起始蛋白浓度为3.65 g L-1 rhSCF包涵体提取液，经稀释复性的纯度达到85%，质量回收率为38.1%，生物比活性4.27 ×105 IU mg-1。再用WAX一步纯化时，rhSCF蛋白的纯度为95%，色谱柱上的质量回收率为76%，生物比活性1.24×106 IU mg-1。从而获得了高活性、高回收率的rhSCF蛋白，这些结果对于大规模的制备生物活性的rhSCF具有非常重要的意义。

Fig.5 Chromatogram obtained from the rhSCF extract solution on the WAX column.
Conditions: solution A: 20mmol/L Tris, pH 8.０, 1.0 mmol/L EDTA; Solution B: the solution A containing 1.0 mol/L NaCl; 30min linear gradient from 0% B to 100% B, flow rate: 2.0 mLmin-1; detection: 280 nm (* rhSCF)

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