LC-ESI/MSMS同时定量测定
抗风湿胶囊中的甲氧苄啶和磺胺甲恶唑
董方霆 吴胜明
国家生物医学分析中心， 北京100850

    风湿病涵盖了侵犯肌肉骨骼系统如关节、肌肉、韧带、肌腱等，以疼痛为主要表现的所有疾病，无论其发病原因如何，均属风湿病范畴。风湿病在我国发病是非常广泛，患者人数众多，久治不愈，反复发作。目前有多种方法用于风湿病的治疗[1]，第一线药物为非甾体抗炎药物（NSAID），具有使关节较快速止痛消肿作用。第二线药物：又称缓解病情药物（DMARD），包括许多改变疾病的抗风湿药物，其中包括。抗风湿西药均存在不同程度的胃肠道副作用、甚至出现肝肾功能损害、性腺抑制、皮疹等。因此，与甾体激素类和非甾体抗炎药相比，中药的副作用小，对肠胃亦无刺激，并且，风湿病以外邪入内为病因，中医扶正祛邪可直接治本。中药在抗风湿药具有独特的优势[1，2]。盐酸青藤碱就是从中药中提取的非常成功的抗风湿药物。中医治疗风湿病可具有如下特点：可根据患者的证候、病情特点因地因时因人治疗，体现了个体化治疗的特点；中药药效作用温和而持久，毒副作用较。然而不法分子正是看中了中药医治风湿的特点，在自制的制剂中加入西药成分，夸大中药的作用，造成了极坏的影响。
    随着现代分析技术的发展，使得我们越来越容易揭示所谓纯中药制剂中添加的西药组分。
1.实验部分
1.1仪器与试剂
    MICROMASS GCT 气相色谱-飞行时间质谱仪， HP6890气相色谱仪；QUATTRO MICRO LC-ESI-MS 三级四极杆质谱仪，Waters Alliance HPLC，色谱柱为Waters Xtterra （2.1X150mm， 5µ）
    甲醇为Merck公司产品， MILLIPORE II去离子水，甲酸及其它试剂均为国产分析纯，磺胺甲恶唑和甲氧苄啶对照品购自中国药品与生物制品检定所。抗风湿胶囊为总后药检所提供。
1.2实验方法
1.2.1 样品的制备
   将待测药物磨成均匀的粉末，分别用酸/碱/中性甲醇、碱/中性乙酸乙酯、氯仿适量超声提取，高速离心取清液，进行后续分析。另准确称取5mg粉末，甲醇水超声提取，离心取上清，待定量分析用。
1.2.2对照品溶液配制
    分别精密称取甲氧苄啶和磺胺甲恶唑25mg、5mg，溶解于甲醇中，定容于100ml容量瓶中，按比例稀释成需要浓度。
1.2.3 定性、定量分析条件
    采用GCT质谱分析进行定性检测。升温程序，外标法校正仪器。EI+离子源，质量扫描范围20~800U. 谱库检索： NIST2002。定量分析采用液质联用方法，流动相甲醇/水/甲酸，正/负离子同时扫描，锥电压33V，碰撞池29V。定量检测采用多离子监控技术（MRM）：甲氧苄啶291>123， 磺胺甲恶唑252>156。
2 结果与讨论
2.1 GCT分析
    我们对该胶囊的甲醇提取液进行了气相色谱-飞行时间质谱检测。对分子质量290，253两个物质进行检索，得知化合物1为甲氧苄啶，化合物2为磺胺甲恶唑，获得了该制剂中添加的化学成分。
2.2方法学考察
    取适量将对照品储备溶液， 稀释后分别配制成125，250，500，1000，5000ng/ml甲氧苄啶及25，50，100，200，500，1000ng/ml磺胺甲恶唑的混合溶液，进行HPLC-ESI-MS/MS分析，上样10ul，根据峰面积和浓度进行线性回归，回归方程分别为y=251.78x+255.456, r=0.9994; y=72.20x+25.00, r=0.9994, 重复性cv%分别小于3.5和4.4（n=3）；回收率不低于96%。
2.3 实际样品的测定
    将提取的样品稀释后，进行定量分析，测得该胶囊内容物中含有甲氧苄啶103mg/g；磺胺甲恶唑26mg/g。
2.4 讨论
    本文结合GCT和LC-ESI/MS-MS技术建立了快速可靠的分析方法，定量测定了抗风湿胶囊中的外加西药成分。该方法还可以应用于其它的中药外加西药成分的检测。本方法检出的二种磺胺类药物在抗风湿的治疗中很少见到报道，推断可能是生产者按照二线药物柳氮磺吡啶的作用干扰叶酸代谢而显示疗效。但是磺胺类药物长期使用或剂量过大时，可产生血液系统不良反应，出现白细胞减少，血小板减少或正铁血红蛋白性贫血， 并且极易产生过敏现象。因此，未加标示让患者服用磺胺类药物是非常危险的。本方法的建立， 可快速检出中药制剂中添加的这两种磺胺类药物。
参考文献：
[1] 叶霜，孙凌云，类风湿关节炎药物治疗进展，中华风湿病学杂志2000，4（2）：112　
[2] 张声鹏.，中医药治疗类风湿性关节炎机理研究的进展，安徽中医临床杂志 2000，12（2）：151
[3] 皮立，用反相高效液相色谱法测定复方头孢氨苄胶囊中头孢氨苄和甲氧苄啶的含量，沈阳药科大学学报，2000，17（2）：119