二十八烷醇的毛细管气相色谱分析方法的研究
雷根虎 卫引茂 张 勇 霍艳敏 熊小虎
（西北大学化学系 陕西 西安 710069）

摘 要：本文采用毛细管气相色谱法（带FID检测器）研究了天然产物提取物中二十八烷醇的测定方法。选用SE-30（25m×0.25mm i.d）毛细管柱，载气为高纯氮气，用角鲨烷为内标物。探讨了各种分析条件对测定结果的影响。回归方程为：y=148.41x-0.0642（r2=0.9992），检出限为0.003ng；方法的回收率为95.18%—100%，相对标准偏差为0.68%—1.5%，此方法准确，快捷,可用于提取物中二十八烷醇的质量检测。
关键词 毛细管气相色谱法； 二十八烷醇 ； 内标法

Study on the Determination of 1-Octacosanol
by Capillary gas chromatography

bstract An Capillary gas chromatography method is developed for the determination of 1-octacosanol extraction from natural products with FID detection. Adequate separation for 1-octacosanol was achieved with a fuse-silica capillary column(25m×0.25mmI.D 0.25μm film thickness), The chromatographic separation was performed with a mobile phase of nitrogen. Quantification was performed by the internal standard method using squalane. Obtain satisfaction result in adopt this analysis method. Coefficient of linear correlation was 0.9992 .The detection limit was 0.003ng .The recovery of the method was 95.18% to 100%. And the RSD was 0.68% to 1.5%. The method was simple, accurate and easy to operate. Reliable for the quality control of 1-Octacosanol in natural products .
Keywords Capillary gas chromatography; 1-Octacosanol ;internal standard method

1 引言
    二十八烷醇作为一种安全，高效的营养型补充剂，具有诸多生物学功能和临床应用价值。通过动物实验，研究者从动物行为学和生化指标的变化，对二十八烷醇提取物的抗疲劳功能进行分析。结果表明，二十八烷醇提取物能够增加小鼠的运动耐力，改善小鼠运动后的多项生化指标，包括BUN含量降低，血清的甘油三酯和肝糖原含量的增加，说明二十八烷醇提取物可以增加毒性代谢产物的排泄，提高机体内供能物质的含量，表现出一定的抗疲劳作用。二十八烷醇提取物具有很大的开发前景。建立二十八烷醇提取物的色谱分析方法具有重要的实际意义[1-7]。本文首次采用SE-30毛细管柱，以角鲨烷为内标物对二十八烷醇提取物进行色谱分析，建立了一种准确，快速的二十八烷醇提取物的气相色谱分析方法。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
    GC-14C气相色谱仪（带FID检测器，日本岛津公司），N2000色谱工作站，空气发生器（北京中惠普分析技术研究所），氢气发生器（北京中惠普分析技术研究所），超声仪（北京医疗设备二厂），高纯氮气99.999%。氯仿（AR，天津化学试剂厂），角鲨烷（GC，上海化学试剂采购供应站分装厂），二十八烷醇标准品（含量为62.3%）及二十八烷醇提取样品。
2.2 色谱条件
色谱柱：SE-30石英毛细管柱（25m×0.25mmI.D自制），进样温度310℃，柱温280℃，检测器温度320℃，，氮气压力 500.0KPa，毛细管柱压力 22.0KPa，分流比1：100，尾吹流量 30 mL/min。
2.3绘制标准曲线
    0.05%内标液的配置：准确称取2.5000 g角鲨烷，加入氯仿溶解，转入250mL容量瓶中，用氯仿稀释至刻度，摇匀。再准确移取12.50mL于250mL容量瓶中，用氯仿稀释至刻度,摇匀,备用。
    标准系列溶液的配置：分别精密称取0.0032, , 0.0096, 0.0161, 0.0225, 0.0289g二十八烷醇标准品(62.3%)于10mL容量瓶中，准确加入8.00mL 0.05%内标液，超声8.00min，待溶液冷至室温后用氯仿定容至10mL, 摇匀放置于50℃水浴中，备用。在2.2色谱条件下每个溶液测定三次，测得内标物和二十八烷醇的色谱峰面积，然后用二十八烷醇的色谱峰面积和内标物的峰面积的比值对二十八烷醇的含量作图，绘制标准曲线。
2.4 样品的测定
    样品溶液的配置：准确称取0.0200g二十八烷醇样品于10mL容量瓶中，准确加入8.00mL0.05%的内标液，超声8.00min，待溶液冷至室温后用氯仿定容至10mL,摇匀放置于50℃水浴中，备用。
在2.2色谱条件下测定，分别测量内标物和二十八烷醇的色谱峰面积，把二十八烷醇的色谱峰面积和内标物的峰面积的比值带入标准曲线中得到测定结果。
3 结果与讨论
3.1溶液配置条件和内标物的选择
    由于二十八烷醇难溶于水,可溶于热乙醇、丁酮、芳香烃、氯仿及油类等有机溶剂。粗提的二十八烷醇提取物样品中又含有大量色素，用乙醇配置样品溶液会带入大量的色素，污染色谱柱；酮类化合物的沸点低，极易挥发，不利于用做二十八烷醇的溶剂。用氯仿做溶剂不会带入过多的色素，它的沸点比丁酮高，更适合用于分析二十八烷醇的溶剂。 二十八烷醇在冷的氯仿中溶解度较低，在室温条件下不能很好的溶解，超声可以加快二十八烷醇的溶解速度，故本实验采用先将样品溶液超声溶解8.00分钟；取出后用溶剂稀释至刻度，放置于50℃的水浴中20分钟，然后再进行分析，测定结果表明，该法重现性好。
    由于样品提取物（甘蔗皮中提取物）中不仅含有二十八烷醇，又含其它等烷基醇和大量的杂质。色谱分析时在二十八烷醇峰的附近还有杂质峰的出现。文献报道用三苯基苯为内标物测定二十八烷醇[3]，根据二十八烷醇和杂质在本色谱条件下的出峰位置，我们选用角鲨烷作内标，在2.2色谱条件下，色谱分离图如图1所示，可以看出达到良好的分离效果。

3.2色谱条件的优化
    目前报道的二十八烷醇的气相色谱分析方法大多都采用填充色谱柱，保留时间比较长，二十八烷醇的出峰位置一般都在十几分钟以后。本实验中采用自制的SE-30石英毛细管柱（25m×0.25mmI.D），进样温度310℃，柱温280℃，检测器温度320℃，分流进样，分流比1：100，进样量 0.6μL ， 尾吹流量 30 mL/min，能很好的将组分分开，而且峰形较好，保留时间大大缩短，在10分钟内就可以将所有组分走完，使实验周期大大缩短。
3.3工作曲线及范围
    将配置的标准系列溶液在2.2色谱条件下进行分析，分别测定内标物和二十八烷醇的峰面积，以二十八烷醇的色谱峰面积和内标物的峰面积的比值对二十八烷醇的含量作图，绘制标准曲线。如图2所示，求的回归方程为：y=148.41x-0.0642 ，相关系数r2=0.9992，含量在0.002—0.020g范围内有很好的线形关系。

3.4方法的精密度和检出限
取两个不同浓度的标准溶液，在2.2色谱条件下进行分析，连续进样六次，方法的精密度测定结果分别为1.22%和0.43%。如表1所示，表明该方法精密度较好。能满足二十八烷醇质量分析的要求。对应于噪声三倍的含量的检出限为0.003ng.

3.5方法的回收率
分别称取两份已知含量的样品分别加入一定量的二十八烷醇，在2.2色谱条件下进行分析，连续进样六次，方法的回收率在95.54%~100.00%之间，测定结果见表2。

3.7 实际样品的测定
利用此方法测定了从原材料到生产成品流程中各种二十八烷醇提取物的含量，能简便快速，准确的对样品进行分析，结果领人满意。
参考文献：
[1] 李如华，于建国 ，舒永华.二十八烷醇与三十烷醇的气相色谱分析 [J]现代仪器，2000，04.
[2] 王穗华，叶放.毛细管气相色谱法测定蜂蜡素及其胶囊中三十烷醇及二十八烷醇的含量 [J]中药材，2001，24（10）.
[3] 陈芳，闫红，蔡同一. 气相色谱法测定糠蜡提取物中的二十八烷醇与三十烷醇 [J]食品科学，2003..24（4）
[4] 矫彩山，王兴强.从糠蜡提取二十八和三十烷醇及产品分析[J]化学工程师，2002，04.
[5] L.A. Pachla, D.S. Wright and D.L. Reynolds, J. Clin Pharmacol, 1986, 26, 332.
[6] F.Hernandez, J.Illnait, R.Mas, G..C.Castano, L.Fernandez, M.Gonzalez, N.Cordovi and J.C. Fernondez, Curr Ther. Res.，1992, 51, 568-575.
[7] N.Perez-Souto, J.Magraner-Hernandez, L.Gonzalez-Bravo, C.M.Mederos, P.C.Acosta, J.L. Reyes and
O.martinez,Revista CENIC.Ciencias Biologicas. 1991, 22, 15.