降糖新药杉糖平有效部位中黄酮类化合物的分离和鉴定
邓玉林1,2*，张永谦1,2，马建龙1，蒋丹1，李伟1,2，戴荣继1,2，禹玉洪1,2
（1. 北京理工大学 生命科学与技术学院，北京 100081；
2. 北京理工亘元医药技术开发中心，北京100081）

摘 要：研究降糖新药杉糖平有效部位中的化学成分。采用大孔吸附树脂、硅胶、Sephadex LH-20柱色谱技术进行分离纯化，通过理化鉴定和波谱分析进行结构鉴定。得到两个单体化合物，分别为5，7，4´-三羟基黄酮（芹菜素）（I）和5，7，4´-三羟基-3´-甲氧基黄酮（柯伊利素）（Ⅱ）。以上两个化合物均为首次从该植物中得到。
关键词：糖尿病；有效部位；黄酮；芹菜素；柯伊利素

Isolation and Identification of Flavonoids from ShanTangPing´s
Effective Anti-Hyperglycemic Fraction

DENG Yu-lin, ZHANG Yong-qian, MA Jian-long, JIANG Dan, LI Wei, DAI Rong-ji, YU Yu-hong
(1 School of Life Science and Technology, Beijing Institute of Technology, Beijing 100081, China;
2 Beijing BIT&GY Pharmaceutical R&D Corp. Ltd., Beijing 100081, China)

Abstract：To study the chemical constituents from ShanTangPing´s Effective Anti-Hyperglycemic Fraction. The compounds were isolated by column chromatography on AB-8, silica gel and Sephadex LH-20 and the structures were elucidated by physicochemical properties and spectral analysis. The two compounds were identified as: 5, 7, 4´-trihydroxyflavone (apigenin) (I) and 5, 7, 4´-trihydroxy-3´-methoxy flavone (chrysoeriol) (Ⅱ). The two compounds were obtained from the plant for the first time.
Keywords：Diabetes mellitus; effective fraction; flavonoid; apigenin; chrysoeriol

    杉糖平系民间验方，具有治疗糖尿病及其并发症的作用，药理实验表明：杉糖平的有效部位“总黄酮”能够显著降低链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠的血糖，改善其糖耐受情况，提高肝糖原含量， 改善“三多一少”症状和延长游泳时间，并能够促进体外培养的胰岛细胞分泌胰岛素，具有多重的降血糖作用机制。但其化学成分研究目前尚属空白，根据高效液相色谱－电喷雾－离子阱质谱[ ][ ]和高效液相色谱－二极管阵列检测器[ ]的检测结果，提示杉糖平含有丰富的黄酮类化合物。黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类天然有机化合物，泛指两个苯环（A环和B环）通过三个碳相互连接，即具有C6-C3-C6基本骨架的化合物。一般分为黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、异黄酮、查耳酮和花色素等类型，在植物的花、叶和果实中多以苷类形式存在，而在木质部坚硬组织中，多为游离的苷元。大多数黄酮类化合物为结晶性固体，在甲醇溶液中有两个吸收带，带Ｉ一般出现在300～400nm，由B环桂皮酰基的电子跃迁引起的；带Ⅱ一般出现在240～280nm，由A环苯甲酰基的电子跃迁引起的。黄酮类化合物还具有各种各样的生物活性，如：抗氧化[ ]、抗癌[ ]、抗炎[ ]、抗菌[ ]等，目前还有研究表明，黄酮类化合物－槲皮素能保护链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠胰腺β细胞损伤[ ]；水飞蓟素能对四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠胰腺有保护并恢复其功能的作用[ ]。为了寻找杉糖平中的有效成分，进一步对其药用开发提供依据，笔者对有效部位中的化学成分进行了研究，共分离得到两个黄酮类化合物。本文报道了来源于杉糖平中5，7，4´-三羟基黄酮（芹菜素）（I）和5，7，4´-三羟基-3´-甲氧基黄酮（柯伊利素）（Ⅱ）的分离和结构鉴定。
1 材料与仪器
    岛津LC-DAD（SPD-M10A VP型）高效液相色谱仪；岛津UV-2550紫外－可见分光光度计；安捷伦 1100 Series LC/MSD Trap；M850型质谱；核磁共振仪Bruke ARX-400，400MHz，TMS为内标，DMSO-d6为溶剂；柱色谱和薄层色谱所用硅胶均为青岛海洋化工厂生产；大孔吸附树脂为南开大学化工厂产AB-8型树脂；药材采自中国安徽省，经专家鉴定为正品。
2 提取、分离和纯化
    称取5kg药材，用80％乙醇加热回流提取3次，每次1.5h，合并提取液，减压回收溶剂，水沉，滤过，滤液上大孔吸附树脂，依次用水、10％乙醇、40％乙醇和70％乙醇洗脱，将70％乙醇洗脱部分经硅胶柱色谱分离（氯仿-甲醇）和Sephadex LH-20（甲醇-水）纯化，得单体化合物Ⅰ和Ⅱ，化学结构式如图1所示。样品纯度经高效液相色谱测定达到95％（归一化法），利用二级管阵列检测器的光谱信息检查目标色谱峰纯度，采用色谱峰不同部位光谱归一化方法，目标物峰纯度均达到99％以上。

3 结构鉴定
    化合物Ⅰ：黄色粉末；mp 339～341℃。盐酸镁粉反应呈阳性。UV λmax ：267，336nm（MeOH）；275,326,394nm（NaOMe），如图2所示，加入NaOMe后带Ⅰ红移58nm，且强度不降低，提示为黄酮类化合物且B环上有4′-OH。EI-MS m/z:270 242 153 152 124 118，裂解方式如图3所示。分子式C15H10O5。1H-NMR（DMSO-d6）中δ12.98单峰为黄酮5-OH的特征信号；δ10.83和δ10.36为酚羟基的信号；δ7.93（d，2H，J=8.8Hz）为2′和6′位氢质子；δ6.93（d，2H，J=8.8Hz）为3´和5´位氢质子，δ6.79为3位氢质子，且经常以一个单峰出现；δ6.20（d，1H，J＝1.9Hz）、δ6.49（d，1H，J=1.9Hz）为8位、6位的质子信号，加入重水后δ12.98，δ10.83，δ10.36质子信号消失，示有三个活泼氢。13C-NMR（DMSO -d6）δ：163.7（C-2）,102.8（C-3）,181.7（C-4）,161.4（C-5），98.8（C-6）,164.1（C-7），93.9（C-8），157.3（C-9）,103.7（C-10）,121.2（C-1´）,128.4（C-2´）,115.9（C-3´）,161.1（C-4´），115.9（C-5´）,128.4（C-6´）。理化常数和波谱数据与文献[ ][ ]对比基本一致，故鉴定为5，7，4´-三羟基黄酮（芹菜素）（I）。

化合物Ⅱ：黄色粉末，mp 324～325℃。盐酸镁粉反应呈阳性。UV λmax：239，267，344nm（MeOH）；264，327，405nm（NaOMe），如图4所示，加入NaOMe后带Ⅰ红移61nm，且强度不降低，提示为黄酮类化合物且B环上有4′-OH。 ESI：301 ([M+H]+)；分子式C16H12O6。1H-NMR（DMSO-d6）中δ 12.98单峰为黄酮5-OH的特征信号；δ10.82和δ9.97为酚羟基的信号；δ7.57（m，2H，J=6Hz）为2′和6′位氢质子; δ 6.94（ｄ，2H，J=9Hz）为5′位和δ6.91（s,1H）为3位氢质子; δ6.52（d，1H，J=2Hz）、δ6.20（d，1H，J=2Hz）为8位、6位的质子信号；δ3.89（s，3H）为一甲氧基信号。加入重水后δ12.98，δ10.82，δ9.97质子信号消失，示有三个活泼氢。理化常数和波谱数据与文献[ ]中数据对比基本一致,故鉴定化合物Ⅱ为5，7，4´-三羟基-3´-甲氧基黄酮，即柯伊利素(chrysoeriol)。

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