HPLC法测定藏药十八味诃子利尿丸中盐酸小檗碱含量
肖远灿 胡凤祖 师治贤
（中国科学院西北高原生物研究所，西宁 810001） hufz@nwipb.ac.cn

摘要：目的：建立十八味诃子利尿丸中的盐酸小檗碱的含量以控制产品质量。方法：采用Symmetry®C18(3.9 mm×150 mm,5 μm)色谱柱；以甲醇-水-三乙胺-冰醋酸（31：69：0.2：0.2，1:1盐酸调pH=3.8）为流动相，流速为1.0 mL×min-1，柱温为室温，检测波长为346 nm，以外标法测定了十八味诃子利尿丸中的盐酸小檗碱的含量。结果：盐酸小檗碱在0.02 ~0.12 mg/mL的浓度范围内呈线性关系。盐酸小檗碱在供试品中的平均回收率为98.7％重复性RSD为2.00%（n=5）。结论：该方法正确、重现性好、操作简便、易行，可用于本品的质量控制。
关键词：十八味诃子利尿丸；小檗皮；盐酸小檗碱；高效液相色谱法
    藏药十八味诃子利尿丸由诃子、草红花、余甘子、小檗皮、等十八味藏药组成，临床适应症为益肾固精，利尿。用于肾病，腰肾疼痛，尿频，小便浑浊，糖尿病，遗精等病症。方中小檗皮为小檗科植物甘肃小檗（Berberis Kansuensis Schneid）的干燥皮，据《晶珠本草》及《青海省藏药标准》中记载，具清热解毒、利目、敛黄水等作用，为藏医常用药之一。盐酸小檗碱为小檗皮的主要活性成分。本文选择了测定小檗皮药材中盐酸小檗碱的含量作为本品质控定量指标，采用了十八烷基键合硅胶色谱柱，建立了一种准确、简便、可靠的小檗碱分析方法，以外标法测定了3批小檗皮药材及10 批十八味诃子利尿丸中盐酸小檗碱的含量，得到了成功的应用。
1. 实验部分
1.1仪器与试剂 Waters515型高效液相色谱仪，Waters 2996二极管阵列检测器，Waters Empower色谱工作站。试剂：甲醇（HPLC级）；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号0831－9501）。
1.2色谱条件：
色谱条件：色谱柱：Symmetry®C18，5μm，3.9×200mm；流动相：甲醇-水-三乙胺-冰乙酸（体积比31：69：0.2: 0.2）；检测波长346nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min。此条件下，盐酸小檗碱与其它组分均能达到基线分离，且阴性对照无干扰（图3.4）
1.3对照品溶液的制备 精密称定盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成1ml含0.1mg的对照品贮备溶液。精密吸取1.0ml置10ml容量瓶中，用甲醇稀释到刻度，制成1ml含盐酸小檗碱对照品10μg，供测试用
1.4阴性对照试验：按质量标准中处方比例制成不含小檗皮药材的十八味诃子利尿丸阴性对照样品；按供试品溶液的制备方法，制备阴性对照液。按上述色谱测定方法测定，结果表明，十八味诃子利尿丸中其它成分对盐酸小檗碱含量测定无干扰。结果见图2。

2. 方法和结果
2.1线性关系考察
配制0.02、0.04、0.08、0.10、0.12mg/mL浓度系列的盐酸小檗碱对照溶液，按上述色谱条件进样10μL测定峰面积，以峰面积值为纵坐标，相应盐酸小檗碱含量为横坐标，作回归曲线，实验结果见表1。从表1测定的结果看出，盐酸小檗碱在0.02 ~0.12 mg/mL的浓度范围有良好的线性关系。

2.2 精密度试验
精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液（0.01mg/mL）10ul重进样5次，测定盐酸小檗碱峰面积，计算RSD值为0.59％。
2.3样品.重复性试验
精密称取同一批样品溶液5份，按供试品制备方法制得待测溶液，依照样品测定方法进样，测定样品中盐酸小檗碱的含量。结果如表4所示。

2.4.回收率试验
精密称取1.0mg盐酸小檗碱对照品，加到已知盐酸小檗碱含量的样品中，按上述样品制备方法制备样品溶液，进样10μL，进行测定，按下式计算回收率，公式：回收率%=（测定盐酸小檗碱总量-样品中盐酸小檗碱量/添加盐酸小檗碱量）×100。结果见表5。

2.5. 样品含量测定
按建立的定方法对3批样品进行盐酸小檗碱含量测定，结果见表6。
表4
3 讨论
3.1流动相组成及pH的选择
在流动相中加入三乙胺，峰形有明显改变，但因流动相pH增高，降低了分离度，以1:1盐酸调节流动相从pH2.0至pH5.0之间，结果表明，在流动相pH4.0时，杂质与盐酸小檗碱的分离度最佳（见图1）。
3.2样品前处理试验
据文献报道[1]，样品中盐酸小檗碱的提取溶剂多选用甲醇溶剂。但十八味诃子利尿丸处方中脂溶性成分较多，用甲醇直接提取，会影响分离效果。根据盐酸小檗碱的性质，先用石油醚浸泡，除去样品中的脂溶性成分，再用甲醇超声提取，得到了好的分离效果。
参考文献
[1] 苏健俊 丁野 RP-HPLC法测定万氏牛黄清心丸(浓缩丸)中盐酸小檗碱的含量
中国药品标准，2005，6（5）19－21
[2] 李小燕. HPLC法测定三黄片中盐酸小檗碱的含量.中成药,2002,24(9):679-680
[3] 《中国药典》 (一部).2005:358
[4]《青海省藏药标准》

HPLC Determination of Berberine Hydrochloride
in Shibawei Hezi Liniaowan Capsulas
XIAO Yuan-can HU Feng-zu and SHI Zhi-xian
(Northwest Plateau Institute of Biology,the Chinese Acadamy of Sciences Xining,810001)

Abstract Objective : To assay Berberine Hydrochloride in Shibawei hezi liniaowan
Capsulas by HPLC for establishing a method of quality control.Method:An ODS column was used with a mobile phase consisted of mixture of methanol –water –triethylamine-glacial acetic acid (31:69:0.2:0.2,by volume ratio) by flow rate of 1.0 mL×min-1 in this method. And UV detector wavelength was 346 nm.Results:The linear range of Berberine Hydrochloride was 0.02~0.12mg/mL(r=0.999 8).The average recovery was 98.7% (RSD=2.00%, n=5). Conclusion: An accurate,simple,rapid qualitative method with good reproducibility to assay Berberine Hydrochloride in Bawei Berberine Capsulas were established.
Keywords Shibawei Hezi Liniaowan Capsulas; Berberine Hydrochloride;HPLC