毛细管电泳化学发光分析法测定左旋多巴的研究
白文玲 赵书林 王兵 何敏
广西师范大学化学化工学院，桂林, 541004

     左旋多巴是神经递质多巴胺的先驱,是广泛用于治疗帕金森疾病的药物。患有帕金森疾病的病人,由于多巴胺的耗尽,从而引起发抖、肌肉发硬、动作迟缓、失去平衡等症状。因为多巴胺不能通过口服直接补充，所以临床上采用口服左旋多巴，经代谢后转化为多巴胺。故建立快速、准确测定左旋多巴含量的方法，对于左旋多巴的临床医学和药理学研究具有重要意义。近年来一些新方法，如：分光光度[1]，电化学传感器[2]，核磁共振[3]，流动注射分析[4]和高效液相色谱法[5]等，已被应用于左旋多巴的测定。毛细管电泳化学发光分析法，由于具有灵敏度高、分析速度快、操作简便、样品和试剂消耗量小等优点，近年来愈来愈受到人们的关注[6,7]。本文基于左旋多巴能增加鲁米诺-铁氰化钾体系的化学发光强度这一特点，结合毛细管电泳化学发光分析技术，建立了毛细管电泳化学发光测定左旋多巴含量的新方法。
1.试剂
Luminol（美国sigma公司）的储备液为10-2 mol/L.1：称取0.0177g Luminol 用2 mL 0.1 mol/L. NaOH溶解后，亚沸水定容至10 mL，避光保存。K3Fe(CN)6储备液为0.01 mol/L. ，避光密封保存。 左旋多巴标准品（美国ACROS ORGANICS公司）。左旋多巴药片（广西河丰制药厂）。硼砂（AR，湖南试剂厂）；所用水为石英亚沸高纯蒸馏水。
2.仪器
毛细管电泳化学发光检测仪为本实验室自行组装，结构如图1所示。

图 1 实验装置图
1.高压电源；2.铂电极；3.分离毛细管；4.氧化试剂储罐；5反应毛细管；6.光电倍增管；
7.反光镜；8废液池；9.计算机；10.暗盒；11.四通接口；12.有机玻璃罩。

3.样品处理
准确称取10 片左旋多巴(标示量: 0. 25 g/片) ,将其研成均匀粉末, 再称取相当于25 mg 左旋多巴的粉末, 置于25 mL 容量瓶中, 加入5 mL 0.1 mol/L HCl溶液并振摇 5 min , 溶解后用水稀释至刻度, 摇匀。用干燥滤纸过滤, 弃去初滤液, 量取续滤液10 mL置于10 mL容量瓶中，作为式样溶液。
于0.5 mL人血清中，加入一定量的左旋多巴标准溶液,使其血药浓度在0.1- 0.5 mol/L之间,加入1 mL乙睛,充分振摇后, 在12000转/分下离心15 min，除去蛋白。取上层清液，用氮气吹干后再用0.5 mL的水溶解，作为式样溶液。
4.毛细管电泳
新毛细管用0.1 mol/L.的NaOH, 亚沸蒸馏水，0.1 mol/L.的HCl分别依次冲洗30 min，10min，30min。两次运行之间，毛细管依次用0.1 mol/L NaOH溶液冲洗5 min,水和电泳缓冲溶液各冲洗2 min。分离毛细管长度为50 cm，内径75 μm。采用重力进样，进样端毛细管抬高20 cm 进样10 S，操作电压为16 kv。所用的溶液均须经过0.45μm纤维膜过滤。
5.化学发光和电泳分离条件
经过一系列条件实验，得到最佳条件为：Luminol, 1.0×10-5 mmol/L.；K3Fe(CN)6, 5.0×10-5 mol/L.；NaOH，0.6 mol/L.；电泳缓冲溶液pH，9.40; 硼砂, 30 mmol/L。在该条件下测定5.0×10-7 mol/L的左旋多巴所得谱图见图2。

图 2 左旋多巴的电泳图
(1) 5.0×10-7 mol/L的左旋多巴; (2)空白溶液

2.2工作曲线、线性范围和检出限
在实验条件下，化学发光强度（峰面积）与左旋多巴浓度在2.5×10-6～5.0×10-8 mol/L范围内有良好的线性关系。线性回归方程和相关系数分别为：[A]=2.487×106C +0.197； r =0.9991。对5.0×10-7 mol/L的左旋多巴进行11次平行测定，得方法的相对标准偏差（RSD）为 4.1％。根据S/N＝3，计算出方法检出限为1.2×10-8 mol/L。
2.3样品分析
按照实验方法，对左旋多巴片进行了8次平行测定，测得峰面积后，代入标准曲线，计算药片中左旋多巴的含量。结果表明，药片标示量为250 mg/片，实测量为252 mg/片，相对标准偏差（RSD）为4.3％。测定结果与标示含量基本一致。应用于加入在人血清中左旋多巴的血药浓度测定时,得到的电泳图见图3，浓度在0.1- 0.5 mol/L之间时,回收率在95-107%范围。

图3.人血清的电泳分离图
(1) 空白血清; (2) 在血清中加入1.0×10-7 mol/L的左旋多巴;
(3) 在血清中加入5.0×10-7 mol/L的左旋多巴

参考文献
1. P. C. Damiani, A. C. Moschetti, A. J. Rovetto, F. Benavente, A. C. Olivieri, Anal. Chim. Acta 543 (2005) 192–198
2．M. F. Bergamini, A. L. Santos, N. R. Stradiotto, M. V. B. Zanoni, J. Pharm. Biomed. Anal. 39 (2005) 54–59
3. Z. Talebpour, S. Haghgoob, M. Shamsipur, Anal. Chim. Acta 506 (2004) 97–104
4. L. K. Abdulrahman, A. M. Al-Abachi, M. H. Al-Qaissy, Anal. Chim. Acta 538 (2005) 331–335
5．K. A. Sagar, M. R. Smyth, J. Pharm. Biomed. Anal. 22 (2000) 613–624
6．S. L. Zhao, C. Xie, X. Lu, Y. R Song, Y-M Liu, Electrophoresis 26 (2005) 1745-1751
7．S. L. Zhao, H. Y. Yuan, C. Xie, D. Xiao, J. Chromatogr. A 1107 (2006) 290-293

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