衍生化-固相微萃联用技术测定肺组织中的脂肪酸
察冬梅 曾昭睿 刘名茗 程冬娥

武汉大学化学与分子科学学院 武汉 430072
中南民族大学化学与材料科学学院分析化学国家民委重点实验室 武汉 430074
武钢集团第二职工医院 武汉4300852

       肺癌是威胁人类生命健康的重要疾病，近年其发病率在世界范围内都不断提高。尽管人们在手术、放疗和化疗等方面做了很多工作，肺癌患者的存活率仍然很低[1-2]。脂肪酸由于与很多慢性疾病（糖尿病、高血压、冠心病、肥胖病等）有一定的联系引起越来越多的注意。 研究表明脂肪酸不仅是生物体一些生命活动的能量提供者，参与类固醇和前列腺素类化合物的合成以及某些蛋白质的修饰，而且是生物体脂类代谢异常的重要标识物，并对基因的表达有重要影响，从而导致生物体代谢、细胞生长和分化的变化[3-9]。本文主要是为肺组织中脂肪酸的测定提供一种灵敏、快速的分析方法，以便确定脂肪酸在肺癌变组织和正常组织中的分布是否存在显著差异，从而为肺癌的病理研究和防治提供一些参考。脂肪酸的分析方法很多，衍生化后用气相色谱进行分析的方法也比较成熟，对肺组织中脂肪酸进行测定，最大的挑战就是其基体组成复杂。固相微萃取由于具有分析速度快、不需要有机溶剂、且能一步实现样品的采集、浓缩和进样等优点得到了广泛应用，特别是顶空模式，由于分析过程中纤维不接触样品基质，分析的重现性好、准确度高，并且萃取纤维的使用寿命相对直接萃取长，在复杂样品的分析中得到了较好的应用。
       本文在基质中直接对脂肪酸进行甲酯化后，采用自制的BMA-OH-TSO固相微萃取涂层对衍生化产物进行顶空萃取，并通过GC-MS进行分离分析，对HS-SPME和衍生化条件进行了优化，并对优化后的方法进行了评价。结果表明，这种方法的精密度、准确度、检出限和线性范围均适于肺组织中脂肪酸的测定。在最佳条件下对同一肺癌患者癌变和正常肺组织中的脂肪酸含量进行了多次重复测定，结果表明（图1），肺组织的主要成分为棕榈酸（C16：0）、硬脂酸（C18：0）、油酸（C18：1）和木焦油酸（C24：0）。癌变组织与正常肺组织相比，除十五酸以外的饱和脂肪酸的含量均有所升高，而不饱和脂肪酸的含量则明显降低。二者在脂肪酸种类和含量上的这些差异，对于肺癌的病理研究和防治可能有一定帮助。作者还在相同条件下与传统的有机溶剂液液萃取方法进行了比较，结果表明，HS-SPME不仅受样品基质的影响小，而且所需样品量也少（图1）。

图1.用HS-SPME和LLE得到的同一肺癌患者癌变组织和正常组织的选择离子图(M/e=74)
A: 1.19mg 癌变肺组织（HS-SPME）; B: 1.29mg正常肺组织（HS-SPME）; C: 1.34mg 正常肺组织（LLE）.

       各峰的定性结果: 1,C12:0; 2, C13:0; 3,C14:0; 4,C15:0; 5,C16:1; 6,C16:0; 7,C17:0; 8,C18:2; 9,C18:1a; 10,C18:1b; 11,C18:0; 12,C19:0; 13,C20:0; 14,C22:0; 15,C24:0.

参考文献
[1] R. Peto, A.D. Lopez, J. Boreham, M .Thun, C. Heath, R. Doll, Br. Med. Bull. 52 (1996) 12.
[2] C.F. Mountain, Chest, 111 (1997) 1710.
[3] T.G. Margarita, R. Caterina, M. T. Nakamura, S. D. Clarke, Biochem. Biophys. Res. Comm. 290 (2002) 1295.
[4] L.Y. Yin, Y.Q. Zhang, T. Charron, BBA/Gene Structure and Expression. 1517 (2000) 91.
[5] X.Z. Zheng, R. Rivabene, C. Cavallari, M. Napolitano, M. Avella, Free Radical Biol. Med. 32 (2002) 1123.
[6] E. Duplus, C. Forest, Biochem. Pharm. 64 (2002) 893.
[7] J. Yang, G.W. Xu, Q.F. Hong, J. Chromatogr. B, 813 (2004) 53.
[8] P. Franck, M. Jean, D. Marie, Interl. J. Cardiol. 78 (2001) 27.
[9] Z. Shen, M. Wu, P. Elson, Gynecol. Oncol. 83 (2001) 25.
参加人：察冬梅
电话；027-62496326
电子邮箱；lucy7791cd@yahoo.com.cn
传真；027-67842752
地址邮编：湖北省武汉市武昌区民院路中南民族大学化学与材料科学学院 430074