红芪药材中与黄芪药材不同成分的TLC鉴别与定量分析
梁贵键,朱莉,姚威,曹磊,胡永礼
（1.空军总医院药学部，北京 100036；2.北京岛津分析中心，北京 100004）

摘要 采用薄层色谱法对红芪药材中的1-3-羟基-9-甲氧基紫檀烷的成分进行了定量研究。研究采用硅胶G板,石油醚(30～60℃)-甲苯-醋酸乙酯 (6∶4∶4)为展开剂进行分离,在λs=530nm, λr= 700nm处采用反射锯齿扫描法进行扫描,线性范围在1.224～6.120μg之间(r=0.9992)。平均回收率为97.88%(n=3),RSD为2.1%。
关键词　红芪,黄芪,1-3-羟基-9-甲氧基紫檀烷, 薄层色谱法,
　　红芪是豆科植物多序岩黄芪(Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz)的干燥根,与黄芪同科异属,最早记载于《神农本草经》黄芪项下,列为上品。陶弘景曰:“有赤色者,可作膏贴,用消痈肿,俗方多用,道家不须”。可见红芪的应用已有较长的历史。在西北地区常将红芪代替黄芪使用[1]。但80年代,日本人久保道德从红芪中分离出黄芪中不存在的抗菌成分“1-3-羟基-9-甲氧基紫檀烷”,为黄芪和红芪的鉴别及分别研究奠定了基础, 我国学者对红芪的研究开始于60年代,80 年代以来对红芪生药学、分布、化学成分进行研究,90年代以来在继续研究红芪对诸多疾病影响机理的同时,还开始对红芪为主组成的复方进行研究[2－6]。本文通过对1-3-羟基-9-甲氧基紫檀烷的测定研究表明,能够有效区别黄芪与红芪,且为红芪药材的质量研究及开发利用提供了科学依据。
1.仪器与试药
SHIMADZU CS-9301PC型薄层扫描仪(日本岛津科学仪器公司);硅胶G:(青岛海洋化工厂);所用试剂均为分析纯;，红芪对照药材和黄芪对照药材(中国药品生物制品检定所提供),1-3-羟基-9-甲氧基紫檀烷对照品(北京大学提供);红芪药材(空军航空医学研究所提供);黄芪药材(本院中药室提供)。
2.实验条件
2.1色谱条件 含0.3%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)的硅胶Ｇ薄层板,在105℃活化1小时;展开剂:石油醚(30～60℃) -甲苯-醋酸乙酯(6∶4∶4);显色剂:2%香草醛硫酸溶液。
2.2扫描条件 双波长反射法锯齿扫描,λs=530nm,λr=700nm,狭缝1.25mm×1.25mm;线性参数:SX=3。
2.3供试品溶液的制备 精密称取红芪药材、黄芪药材粉末各5g,置索氏提取器中,加石油醚(60～90℃)80mL,置水浴上加热回流6小时,提取液移至分液漏中,用1%碳酸钾溶液振摇提取3次(20、20、10mL),合并碳酸钾液,用稀盐酸调pH值＝2.2,再用乙醚振摇提取3次,每次20mL,合并乙醚液,蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为红芪药材、黄芪药材供试品溶液。
2.4对照品溶液的制备 精密称取1-3-羟基-9-甲氧基紫檀烷对照品适量,加甲醇制成0.612mg/mL的溶液,作为对照品溶液。
2.5对照药材溶液的制备 精密称取红芪对照药材5g,按供试品溶液的制备同法制成对照药材溶液。
3.线性关系 精密吸取对照品溶液(0.612mg/mL)2 0、4 0、6 0、8 0、10 0μL,分别点于同一薄层板上,展至约18cm,喷雾显色,测定。以斑点峰面积积分值为纵座标,点样量(μg)为横座标,绘制标准曲线,其回归方程为:Ｙ=99824.5Ｘ-10065.8, r=0.9993(n=5)说明在1.224～6.120μg范围内,方法线性关系良好。
4.稳定性 精密吸取对照品溶液6μL,点于薄层板上,展开,显色,每隔0.5h扫描1次斑点,结果按8次斑点峰面积积分值计算RSD为4.1%,按放30min后,7次斑点峰面积积分值计算RSD为2.9%,即表明显色后,应间隔一定时间进行测定,斑点积分值3h以内是稳定的。
5.精密度 精密吸取对照品溶液6μL,在同一薄层板上重复点样6次,展开,显色,测定斑点峰面积积分值,RSD为1.8%;同法进行异板精密度测定,RSD为3.3%(n=6)。
3.6重现性考察 按拟定的含量测定方法,对同一批红芪药材进行多次测定,RSD为1.9%(n=5)。
6.回收率试验
   精密称取一定量的红芪药材粉末,准确加入对照品一定量,按本文方法提取,测定,计算平均回收率为98.18%(n=3),RSD为2.1%。
7.样品的测定
精密吸取1-3-羟基-9-甲氧基紫檀烷对照品溶液4μL、6μL,红芪对照药材溶液及甘肃2产地红芪药材溶液,黄芪对照药材溶液及2产地黄芪药材溶液各10μL,分别点在同一薄层板上,展开,晾干,显色,扫描,测定结果见表1。

8.讨论
8.1在提取实验中，经冷浸、超声、索氏提取等不同的提取方法及不同时间的结果比较,索氏提取6小时较完全。1-3-羟基-9-甲氧基紫檀烷在1%碳酸钾溶液中提取完全。用稀盐酸酸化,调pH2.2时最适宜。
8.2曾用石油醚(30～60℃)－甲苯－醋酸乙酯(10∶3∶3)、(10∶5∶5)、(6∶4∶4)等不同展开系统试验和碘蒸气、2%三氯化铁的50%乙醇50%水溶液、5%酸性三氯化铁溶液、1%香草醛硫酸溶液等不同显色剂试验比较,石油醚(30～60℃)-甲苯-醋酸乙酯(6∶4∶4)为展开剂,1%香草醛硫酸溶液为显色剂最适宜。
8.3当用展开剂石油醚(30～60℃)-甲苯-醋酸乙酯(6∶4∶4)展开,晾干后,置紫外灯(254nm或365nm)下检视,均在供试品色谱图中,清晰呈现出除有与黄芪相同颜色荧光斑点外,在Rf值约0..30处显现黄芪没有的兰紫色荧光斑点,此点为何成分,尚不清楚,有待进一步研究。用1%香草醛硫酸液喷雾显色后,在供试品色谱图中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的清晰桃红色斑点,无干扰,Rf值约为0.49,而黄芪无此斑点。因此,此法可鉴别红芪药材与黄芪药材,且可作为红芪药材的质量控制方法。
8.4红芪不含黄芪甲苷。红芪和黄芪都含毛蕊异黄酮和芒柄花素。但是红芪中芒柄花素的含量高于毛蕊异黄酮,而黄芪中芒柄花素的含量低于毛蕊异黄酮。有关色谱研究另文报道。
参考文献
1 潘竞先,刘薇,卫东,等.红芪化学成分的研究Ⅰ.北京医学院学报,1984,16(3):248-250.
2 金智生,汝亚琴.中药红芪的实验研究进展.甘肃中医学院学报,2003,20(4):52-56.
3 罗文蓉,杨扶德,张雅聪.红芪的生药学研究.时珍国医国药,2004,15(3):57.
4 白娟,黄正良,李萍.红芪对油酸型肺损伤大鼠肺泡表面活性物质含量及板层小体的影响.中药药理与临床,1997,13(2):26.
5 高效液相色谱法研究红芪指纹图谱.分析化学,2004,32():710～714.
6 海力茜,张庆英,梁　鸿,等.多序岩黄芪化学成分研究,药学学报,2003,38(8):592-595.

Identification and Quantification for unique component in Hongqi and Huangqi Herbs by TLC
1LIANG Gui-Jian, 1ZHU Li, 2Yao Wei 2Chao Lei 2HU Yingli
(1General Hospital of Air Force，Beijing，100036;,2Shimadzu analytical center of Beijing, Beijing 100004)

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