甘草炮制的高效液相色谱研究
孟翔宇，刘志强*，刘淑莹
（中国科学院长春应用化学研究所，吉林 长春 130022）

摘要：采用高效液相色谱法优化了甘草炮制的温度和时间。以甘草中主要药效成分甘草苷和甘草酸为考察对象，优化了甘草炮制的温度和时间。最佳炮制条件为：烘烤时间2h、烘烤温度110℃。结果表明：高效液相色谱法测定甘草苷和甘草酸含量简便、快捷、准确。通过该方法确定的炮制方法便于控制和统一炮制品品质。
       甘草（Glycyrrhiza uralensis）是重要传统中药，在传统处方中应用广泛，如《金匮要略》的143个处方中，有近60%的处方含有甘草。中医学认为：甘草有解毒、调和药性的作用，常用于清热解毒、润肺祛痰、补气宜脾、调和诸药等。甘草苷（liquiritin）和甘草酸（glycyrrhizic acid）为甘草中的主要药效成分。甘草在处方中应用以蜜炙甘草形式居多，本文采用蜜拌甘草烘烤法炮炙甘草，使炮制条件便于控制。通过HPLC方法对甘草酸和甘草苷进行定量分析，确定烘烤时的烘烤温度和烘烤时间。现有报道利用薄层层析法、紫外分光光度法测定炮制前后甘草酸、甘草苷含量变化[1,2]，但无优化炮制条件的报道。
1. 实验部分
1.1 试剂、仪器
       蜂蜜为市售，购回后炼制中蜜备用；甘草市售（白城）；甲醇色谱纯；水为超纯水（18.2MΩ）；其他试剂均为色谱纯。Waters2695高效液相色谱，2996二极管阵列检测器(Waters Co. , Milford, MA,U SA )。
液相色谱条件: DIKAMA ODS-C18色谱柱, 5µm, 4.6 mm×250 mm; 流动相:
甘草酸：甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67：33：1）；检测波长250nm。进样量10μL。
甘草苷：乙腈- 0.5% 冰醋酸(1:4）；检测波长为 276nm 。进样量20μL。
1.2 实验方法
1.2.1甘草炮制：
取蜂蜜36g，水18g混匀，取甘草240g与蜂蜜拌匀闷润过夜。
烘烤时间的影响：设置烘箱温度90℃，取样品120g分为五份，分别烘烤2h，3h，4h，5h，6h。取出放凉粉碎备用。
烘烤温度的影响：取上述润透甘草适量，取样品120g分为五份，设置烘箱温度80℃，95℃，110℃，125℃，140℃，分别烘烤2h。取出放凉粉碎备用。
1.2.2标准品制备：
        称取0.57mg甘草酸标准品甲醇定容于2ml容量瓶备用；称取甘草苷标准品适量，配制50μl/ml甘草苷标准品备用。
1.2.3样品制备：
       甘草酸测定用样品：取本品粉末约0.3g，精密称定，置50ml容量瓶中，加流动相约45ml,超声处理（功率250W，频率20kHz)30分钟，取出冷却，流动相定容，滤过。
       甘草苷测定用样品：取本品粉末约 0.2g，置 25ml 锥形瓶中，精密加入70%乙醇10ml，称定重量，超声提取 30min，冷却称定，补足失重。过滤，精密量取续滤液5ml于100ml量瓶中，用20%乙腈定容摇匀。
2. 结果与讨论
       用烘箱烘烤炮制甘草，操作简便，安全可靠，便于控制。甘草苷与甘草酸是甘草中主要药效成分，故选用甘草苷和甘草酸含量做为考察指标，优化甘草炮制的烘烤温度和烘烤时间。
2.1不同烘烤时间的影响
       为考察不同烘烤时间对甘草炮制的影响，按1.2.1中烘烤时间的影响项下方法制备炮制品。应用1.2.3项下方法分别配制甘草酸和甘草苷测定用样品。采用1.1中液相条件分别测定炮制品中甘草酸和甘草苷含量。定量法采用外标一点法。不同时间结果见图1。

图1烘烤时间对炮制品中甘草酸和甘草苷含量的影响       图2烘烤温度对炮制品中甘草酸和甘草苷含量的影响

        由图1可以看出甘草酸含量在4h时达到峰值，2h时含量次之；甘草苷含量在2h时为峰值，3h为最低值，之后含量升高，5h之后含量稳定。考虑到2h时无论甘草酸还是甘草苷含量均为较高值，且炮制时间最短，选择炮制时间为2h。
2.2不同烘烤温度的影响
       在考察烘烤温度的影响时，设定烘烤时间为2h。按1.2.1中烘烤温度的影响项下方法炮制甘草。按照1.2.3项下方法分别配制甘草酸和甘草苷测定用样品。不同时间结果见图2。
由图2可知，甘草酸和甘草苷含量变化有相似的趋势，先降后升再降，最后达到稳定。在110℃时甘草酸含量最高，甘草苷含量仅次于80℃时，又80℃时炮制品未全干，不便于保存，所以选用110℃为最终烘烤时间。
3结论
       本文采用药典测定甘草酸、甘草苷含量的液相条件，考察了不同烘烤时间和不同烘烤温度对甘草炮制的影响。所给出的条件便于控制，简便易行，质量稳定，是炮制后甘草酸和甘草苷含量最高的条件。此条件对于实际生产有一定的参考性价值。
参考文献：
[1]、刘成基等，甘草及炮制品中甘草酸含量测定方法，中药材，1991，1（14）：31
[2]、江觉民等，蜜炙甘草烘法炮制的动力学研究，贵阳中医学院学报，1992，4（14）：58

Study the concoction of Liquorice by HPLC
Meng Xiangyu , Liu Zhiqiang* , Shuying Liu
(Changchun Institute of Applied Chemistry , Changchun 130022,PR China)

Abstract: The roast temperature and time of Liquroice’s concoction was optimized by using HPLC. The main effect components of medicine in Liquorice (glycyrrhizic acid and liquiritin) were detected. The best condition is that the roast time was 2h and the roast temperature was 110℃.The experimental results demonstrated that the method of HPLC used to detect the content of glycyrrhizic acid and liquiritin were handy, shortcut and nicety. The concoction method was easy to control and the quality of concocted Liquroice is easy to unionize.
Keywords : Liquorice , HPLC , concoction .

刘志强
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