用HPLC/离子对法测定阴道冲液中壬苯醇醚、度米芬的含量研究
邵长凤 张颖 陈坚 沈丽琳
天津计划生育研究所（300191） shenlilin@sina.com

关键词：壬苯醇醚、度米芬、HPLC/离子对法
    阴道冲液是我所自行研制的产品，其主药成分壬苯醇醚、度米芬是两种具有相同的母核结构，化学、物理性质相似的物质。在测定所需的紫外光的最大吸收波长也存在部分重叠覆盖（壬苯醇醚276nm，度米芬275nm、267nm），采用一般HPLC法，由于色谱峰保留时间很近，分离效果差，故难以测定样品中各组分的含量。为此，本文采用HPLC/离子对法对阴道冲液中壬苯醇醚、度米芬的含量测定进行研究，试验结果表明，本法用于测定该阴道冲液中壬苯醇醚和度米芬的含量，切实可行，具有方法简单、结果准确的特点，可用于该阴道冲液的质量控制。

试验方法法如下:
1 仪器及试药
   仪器：高效液相色谱仪 （日本岛津LC-6A型）
   试验药品：对照品：CO-630（壬苯醇醚 Nonoxynol-9药用，美国FDA生产）；度米芬(西南制药一厂)；PIC-B8离子对色谱试剂（天津化学试剂二厂）；供试样品 （由本所制剂室提供）。甲醇（色谱纯）；高纯水
2方法与结果
2.1色谱条件
   色谱柱：Eka Nabel Kromasil TM C18 （20cmⅹ4.6mm）
   流动相：甲醇：水（80：20）各含５mM PIC-B8离子对试剂；
   流速：1.2ml/min 纸速：1mm/min；检测波长：UV267nm
2.2溶液配制：
2.2.1、线性试验用对照品储备液的配制：分别精密称取壬苯醇醚、度米芬500mg和250mg置同一50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀、备用。
2.2.2含量测定用对照品溶液的配制：精密称取壬苯醇醚500mg置50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为溶液A备用；精密称取度米芬250mg置50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为溶液B备用。分别精密量取溶液A、溶液B各10ml，置同一50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，要匀、备用。
2.3线性关系及精密度2.3.1标准工作曲线制作：精密量取对照品储备液0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml和2ml分别置于10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。依2.1项下的实验条件进行测定，记录色谱图。外标法定量。以峰面积（Y）为纵坐标，浓度（X,mg/ml）为横坐标作图，并进行线性回归分析。
    壬苯醇醚的线性回归方程为：Y=32.05X-0.42相关系数r=0.9995，度米芬的线性回归方程为Y=12.05X+0.52相关系数r=0.9906。实验表明，壬苯醇醚、度米芬的浓度范围分别在0.4~2 mg/ml和 0.2~1mg/ml范围内呈线性关系，符合比尔定律。
2.4、回收率试验：依比例，加入不含被测组分的空白样品，分别置3个10ml的量瓶中，各精密加入对照品储备液0.4ml、0.8ml、1.2ml，加流动相稀释置刻度，摇匀，依2.1项下的实验条件进行测定，记录色谱图。
    另精密取对照品储备液1.2ml，置入10 ml容量瓶中，加流动相稀释置刻度，摇匀，作为对照品溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，求得实测对照品的浓度（mg/ml）与理论加入的浓度（mg/ml）之比的百分数，即得。测的结果见表1，壬苯醇醚平均回收率为99.80%，度米芬平均回收率为100.20%，相对标准偏差分别为1.12%和0.98%。

表1回收率试验结果

2.5精密度试验：精密吸取对照品储备液ml，置于10ml测定中加流动相稀释至刻度，摇匀，取该溶液连续6次在所述色谱条件下分别进样20μl，测定的壬苯醇醚、度米芬峰面积的相对标准偏差分别为0.89%和1.38%
2.6干扰试验：取适量的空白样品液，置10ml的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，依2.1项下的实验条件进行测定。结果表明，空白样品对含量测定无干扰（见图1中a）。
2.7稳定性试验：取一份供试品溶液，分别在0、2、6、12和24h内测定，所的结果一致，表明用流动相配制的供试品溶液的稳定性好。
2.8含量测定：取供试样品和2.2.2项下制备的含量测定用对照品，依2.1项下的色谱实验条件进行测定，测的3批供试样品含量结果见表2，相对标准偏差分别为壬苯醇醚1.56%、043.%和0.96%。度米芬1.72%、0.68%和1.29%。

表2样品含量测定结果（n=3）

3、讨论
3.1检测波长的选择:以流动相作为溶剂的壬苯醇醚、度米芬溶液均吸收紫外光，最大吸收波长分别为276nm和267nm，且度米分在275nm处还有一个次吸收，为降低干扰，则将检测波长设定为267nm。
3.2色谱图：空白、对照及被测样品在所确定的色谱条件下，分离结果见图1中的（a、b、c）

图1空白、对照及被测样品色谱图

a、空白色谱图 b、对照品色谱图 c、样品色谱图
（ 注： 图中 1.度米芬 2.壬苯醇醚）

3.3 实验表明，样品中的共存组分在该色谱条件下互不干扰，,两主药成分的色谱峰分离效果较好，色谱峰形对称、尖锐，显示出该色谱体系具有较好的实用性。为此，本方法用于测定该样品中壬苯醇醚和度米芬的质量控制，切实可行，具有方法简单、结果准确的特点。