高效液相色谱法测定二苯并[b,f]-1,4-氧杂吖庚因
左 明 刘昌财 夏爱武
中国人民解放军61699部队，湖北枝江443200

摘要：建立了二苯并[b,f]-1,4-氧杂吖庚因的高效液相色谱测定方法。采用Supelcosil LC-18色谱柱，以乙腈-甲醇-水（36：13：51）为流动相,二苯并[b,f]-1,4-氧杂吖庚因与其主要中间体完全分离。本方法线性关系良好，回收率、精密度均符合要求，可用于二苯并[b,f]-1,4-氧杂吖庚因的含量测定。
关键词：二苯并[b,f]-1,4-氧杂吖庚因；高效液相色谱

1 前言
   二苯并[b,f]-1,4-氧杂吖庚因，代号为CR，结构如图1所示。二苯并[b,f]-1,4-氧杂吖庚因（以下简称CR）于1962年首次合成[1]，七十年代美、英等国家将其列为正式装备，用于催泪防暴。与CS、CN等早期的刺激剂相比，CR的刺激作用强烈、对人体毒性小、几乎不产生持久性伤害、安全比大 [2,3]，是一种较为理想的化学防暴剂。
   从CR的合成路线中分析，CR中可能含有的主要杂质见图1。气相色谱法和GC-MS法测定CR已有文献报道[4,5]，本文采用高效液相色谱法建立了CR刺激剂的测定方法。
 

图1 CR及其主要中间体的化学结构式

2.试验部分
2.1 试剂
   乙腈（HPLC级，Fisher Scientific），甲醇（HPLC级，Fisher Scientific），三蒸水（实验室自制），西阿尔对照品（含量>99.5%）以及各种中间体对照品（含量>95%）均由我部合成室提供。
2.2 仪器
   Perkin-Elmer series 200二元泵，Applied Biosystems 785A 可编程紫外检测器，PE Nelson 900 series 接口，PE Nelson Turbochrom 色谱工作站及Rheodyne 7725i 20 μl手动进样系统。
2.3 色谱条件
   色谱柱：Supelcosil LC-18柱（150 × 4.6 mm ID，5 μm）。流动相：乙腈-甲醇-水（36：13：51）。流速：1 ml/min。紫外检测波长：230 nm。柱温：室温。

3 结果与讨论
3.1 流动相的选择
   起初，我们以乙腈-水混和溶液作为流动相，结果发现西阿尔与中间体II色谱峰严重重叠，将流动改变为同等洗脱强度的甲醇-水混合溶液，西阿尔与中间体I又无法完全分离，最终选择体积比为36：13：51的乙腈-甲醇-水作为流动相。在此色谱条件下，西阿尔与主要中间体完全分离（见图2）。
 

图2 CR及其主要中间体分离色谱图

3.2 线性
   分取浓度为2 mg/ml的西阿尔标准溶液用流动相稀释为浓度分别为20、40、60、80、100 μg/ml的系列溶液。各取20 μl进样，按上述色谱条件进行HPLC分析。以西阿尔峰面积A对其浓度C作线性回归，回归方程为：A = 65619C + 14223（r = 0.9998，n=5）,其中A为西阿尔色谱峰面积，C为西阿尔浓度（μg/ml）。CR含量测定的色谱图见图3。

图3 CR含量测定色谱图

3.3方法回收率
   取低、中、高三个浓度的西阿尔标准溶液，按上述色谱条件进行回收率实验，平均相对回收率在99.4-100.5%之间（n=3）。
3.4 精密度
   取低、中、高三个浓度的西阿尔标准溶液，按上述色谱条件进行分析，一天内重复测定三次，测得天内精密度为0.32～0.63%，连续测定3天，测得天间精密度为1.3～1.6%。
3.5 灵敏度
   经测定，本法对西阿尔的最低检测限为1.3 ng (S/N=3)；定量限为4.4 ng (S/N=10)。
3.6 样品测定
   取西阿尔样品约50 mg，精密称定，加水溶解并定容至25 ml。将此溶液以流动相稀释至50 μg/ml的溶液，另取浓度为50 μg/ml的西阿尔标准溶液，分别取此二种溶液20 ul注入液相色谱仪，记录色谱图，外标法计算样品中西阿尔的含量，样品含量在97.2～98.4%之间。

4 参考文献
[1] Higginbottom R, Suschitzky H. Syntheses of heterocyclic compounds. Part II. Cyclisation of o-nitrophenyl oxygen ethers. J Chem Soc 1962,2367-2370
[2] Rengstorff RH, Petrali JP, Mershon MM, Sim VM. Effect of the roit control agent dibenz[b,f][1,4]oxazepine (CR) in the rabbit eye. Toxicol Appl Pharmacol 1975,34:45-48
[3] Ballantyne B, Gazzard MF, Swanston DW, Williams P. The Comparative Opthalmic Toxicity of 1-Chloroacetophenone (CN) and Dibenz[b,f][1,4]Oxazepine (CR). Arch Toxicol 1975, 34:183-201
[4] D’Agostino PA, Provost LR. Gas chromatographic retention indexes of chemical warfare agents and simulants. J Chromatogr 1985,331:47-54
[5] Wils ERJ, Hulst AG. Gas chromatographic-mass spectrometric identification of tear-gases in dilute-solutions using large injection volumes. J Chromatogr 1985,330:379-382

Determination of Dibenz[b,f][1,4]Oxazepine by High Performance Liquid Chromatography
ZUO Ming LIU Chang-Cai XIA Ai-Wu
61699 Troops of PLA, Zhijiang 443200

Abstract: A high performance liquid chromatographic method has been developed for the determination of Dibenz[b,f][1,4]Oxazepine. A good resolution between Dibenz[b,f][1,4]Oxazepineand and its main intermediate compounds has been achieved on a Supelcosil LC-18 column with a mobile phase consisted of acetonitrile-methanol-water (36:13:51). The method has been validated to be linear, accurate and precise, and can be used for the assay of Dibenz[b,f][1,4]Oxazepine.

KeyWords: Dibenz[b,f][1,4]Oxazepine; High Performance Liquid Chromatography