化妆品中氯霉素的气相色谱/质谱
快速分析方法研究
白 桦 王海波 邱月明
（中国检验检疫科学研究院工业品研究所，北京 100025）

摘要：本文研究了用气相色谱/质谱(负化学电离源)（GC/MS(NCI)）分析化妆品中氯霉素(CAP)的方法。以乙酸乙脂作为提取溶剂，BSTFA+TMCS（99+1）作为衍生化试剂，在70℃衍生化60min，用GC/MS(NCI)进行测定。方法的检出限为10µg/kg，线性范围在0.5ng/mL～500ng/mL之间，在10µg/kg、100 µg/kg、500 µg/kg3个添加水平，方法回收率为94.4%—95.7%，相对标准偏差为0.23%—1.34%。方法操作快速简单，3小时可以完成整个样品分析。所建立的方法直接用于化妆品中氯霉素的测定，结果令人满意。
关键词：氯霉素，化妆品，气相色谱-质谱法，负化学电离

   氯霉素(Chloramphenicol，CAP)是一种广谱抗菌药物，目前主要通过人工合成方法制成。因为氯霉素具有抑制人体骨髓造血功能，引起再生障碍性贫血，以及造成“灰婴综合症”等毒副作用，世界上许多国家和地区早已停止生产和使用氯霉素，并将它列为A类禁用药物，同时也禁止在化妆品中使用该类抗生素药物[1]。我国《化妆品卫生标准》GB7619-1987明确规定化妆品中禁止使用抗生素类药物。然而，由于历史的原因和利益驱动，氯霉素曾经被广泛用于各种动物传染性疾病的治疗，并且仍然被一些不法经营者用在青春痘，痤疮，粉刺等炎症的治疗中，杀灭痤疮丙酸杆菌所产生的炎性介质。因此，建立化妆品中氯霉素的检测方法，监测祛痘类化妆品中氯霉素是非常必要的。
   食品和药品中氯霉素的分析方法有许多文献报道[2~5]，常规制剂的测定方法主要采用传统的气相色谱和液相色谱方法，血样和食品中残留分析主要采用气相色谱/质谱和液相色谱/质谱方法。目前尚未见文献报道测定化妆品中氯霉素的方法。本文研究了一种采用GC/MS测定化妆品中氯霉素的方法。样品经过提取和离心后，不需要进一步净化，直接进行选择性测定。方法灵敏度、快速，用于测定化妆品中的氯霉素，结果准确、可靠。

1 实验部分
1.1 仪器与试剂
   气相色谱-质谱联用仪6890/5973N（美国Agilent公司）；高速冷冻离心机（日立）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。氯霉素标准品(美国Sigma公司)；衍生化试剂BSTFA+TMCS 99+1(美国Supelco公司)；甲醇、甲苯和正己烷（农残级，瑞士Fluka公司）；乙酸乙脂（分析纯）。
1.2 分析条件
   色谱条件： HP- 5MS毛细管柱 30m×0.25mm（内径）×0.25μm（膜厚）；柱温为程序升温，初始温度为50℃恒温，保留1min，然后以25℃/min升至280℃，恒温5min；进样口温度250℃；进样方式：不分流进样，开阀时间0.75min载气为高纯氦气；流速1ml/min，进样量1µl。
   质谱条件：NCI电离方式，离子源温度：150℃；四级杆温度：114℃；选择离子监测方式（SIM）；定量离子m/z 466、376、378、470；去除溶剂时间3.5min，质谱采集时间3.5～15min。
1.3 标准储备液的配制
   准确称取10.0mg氯霉素标准品于100ml容量瓶中，用乙酸乙脂稀释至刻度，配制成100ug/mL氯霉素标准储备液。
1.4 样品处理
   称取化妆品样品约0.5g于10ml具塞比色管中，用乙酸乙脂定容至刻度，超声震荡20min。取部分溶液放入离心管中，在5000rpm离心10min，取上清液过0.45mm滤膜，移取滤液1ml于进样小瓶中，用氮气吹干，加入衍生化试剂(BSTFA+TMCS，99+1)和溶剂甲苯，密封后，在70℃衍生化60min；用氮气吹至近干，用1ml正己烷定容，进行GC-MS测定。

2 结果与讨论
2.1 提取溶剂的选择
   实验中选择了正己烷、丙酮、乙酸乙酯和甲苯等作为溶剂，提取化妆品中的氯霉素。其中丙酮对于膏霜类化妆品的提取容易提出较多的杂质，而与水类化妆品产生混溶。采用正己烷提取效率不高。甲苯和乙酸乙酯具有较好的提取效率，但前者带来的干扰大于后者，为了简化分析步骤，故采用乙酸乙酯。
2.2 衍生化条件的选择
   氯霉素分子中含有多个极性官能团，很难挥发。因此，在使用GC或GC/MS进行测定前，需要对其极性官能团进行衍生化处理[3]。选择BFT（N,O-二[三甲基硅]三氟醋酸胺(BSTFA)/三甲基氯硅烷(TMCS)(99+1)）[4] 作为衍生化试剂，同时在衍生化体系中加入一定量的甲苯作为反应介质，以提高响应信号[5]。
2.3 选择离子的确定
   由于氯霉素分子中含有电负性较高的卤素原子，因此采用负化学电离源检测灵敏度较高。通过氯霉素的标样GC-MS总离子流色谱图（图1）和质谱图（图2），选择4个特征离子376，378，466，470作为定性离子；实验证明，以氯霉素的分子离子m/z 466为定量离子绘制标准曲线效果较好。
   在选定的色谱条件下，通过采用选择离子方式，可以得到良好的色谱图，即使不经过进一步净化，也没有明显的杂质干扰测定， 见图3和图4。
 

图1 氯霉素标样GC-MS离子流色谱图


图2 氯霉素质谱图

图3 添加样品GC-MS离子流色谱图

图4 除痘化妆品GC-MS离子流色谱图

2.4 方法的线性范围和检出限
   直接使用氯霉素标准溶液衍生化后进样绘制的标准曲线线性较差，因为使用的标准溶液浓度较低，而体系中微小的活性点对于氯霉素的吸附作用对氯霉素的响应信号影响严重，因此建立了添加标准曲线的方法。用氯霉素标准储备液分别配制500、200、100、50、20、10、5ng/mL系列标准溶液。取每个标准溶液1ml，添加到0.5g的空白样品中，加入9ml乙酸乙酯，按样品处理的方法对添加标准溶液的样品进行衍生化,衍生化的标准溶液。进行色谱-质谱测定，以氯霉素定量离子的峰面积（Y轴）对氯霉素的质量浓度（X轴）作图，在10－1000µg/kg范围内，氯霉素的线性方程为：Y=361X-937，相关系数：R2=0.995
2.5 方法的检出限、回收率和精密度
   用不含氯霉素的化妆品样品进行10µg/kg、100µg/kg 、500µg/kg 3个添加水平的回收率精密度实验,每一浓度平行测定6个添加样品，结果列于表1。
表1 化妆品中添加样品的回收率和精密度

  从表1中的数据可以看出，在10－500µg/kg添加范围内，平均回收率在76.1%—95.3%之间，相对标准偏差在10.1%－14.3%之间，说明方法的重复性较好。当氯霉素的添加浓度为10µg/kg时，所测谱图的信噪比S/N＞3。因此氯霉素的最低检出限为10µg/kg。
2.6 实际样品分析
   用本方法分析了市场上销售的18种祛痘类化妆品，结果发现其中5种含有氯霉素，结果见表2。

表2 不同样品中氯霉素的检测结果

参考文献：
[1] 李俊锁，邱月明，王超. 兽药残留分析[M]. 上海：上海科学技术出版社，2002. 393-412.
[2] 关日晴. [J].分析测试学报，2002，21(6):96-97.
[3] NAGATA T，OKA H. [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，1996，44:1280-1284.
[4] PFENNING A P，MADSON M R，ROYBAL J E，et al. [J]. Journal of AOAC International，1998，81 (4): 714-720.
[5] 谢孟峡，刘 媛，邱月明，等. [J]. 分析化学，2005，33(1): 1-4.