固相微萃取-高效液相色谱法分析苹果中的速灭威和乙霉威

杨秀敏，陈永艳，王志，胡彦学， 王春，吴秋华
(河北农业大学理学院生物无机实验室，河北 保定 071001)

1、引言
    样品前处理往往是整个分析过程中的重要环节，常用的样品前处理技术主要有液液萃取法、固相萃取法、超临界流体萃取法等，这些方法都不同程度的存在如操作繁琐、费时、需要大量有机溶剂等缺点。1990年Pawliszyn等[1] 首次提出了固相微萃取（SPME）技术，一种新型的样品预处理技术，与传统的前处理技术相比，具有集分离、净化、浓缩、进样于一体，无需使用有机溶剂、快速、简单、易于实现自动化，能与气相色谱仪（GC）和液相色谱仪(HPLC)联用等优点。SPME-GC方面的研究较多并用许多文献报道[2 ~ 4]，然而它不适用于热不稳定、极性大、难挥发物质的分析。SPME-HPLC技术的出现恰可弥补SPME-GC方面的一些不足。近年来，SPME-HPLC技术一直在不断发展并在农残检测方面得到了一些应用[5 ~ 8]。速灭威和乙霉威是常用的氨基甲酸酯类农药，在农业生产中应用广泛。因此，其残留检测具有重要的现实意义。目前，国内鲜有关于水果中氨基甲酸酯类农药的SPME – HPLC的分析方法的报道。本文建立了苹果中速灭威和乙霉威的SPME – HPLC的分析方法。对固相微萃取条件和色谱条件进行了优化，本方法简单、方便、不使用有机溶剂，具有较好的精密度和回收率，适合苹果中速灭威、乙霉威的分析。
 

1.实验部分：
1.1仪器
    Waters600高效液相色谱仪，Millenium32色谱工作站、996二极阵列检测器、在线脱气装置（美国Waters公司）；Baseline C18 柱（4.6 i.d.×250 mm，5.0 μm，石家庄奥美克医药科技有限公司）SPME装置（包括萃取操作台、4mL萃取瓶、微型磁转子、萃取手柄、60μm聚二甲基硅氧烷/二乙烯苯（PDMS / DVB）萃取纤维、70 μm聚乙二醇/二乙烯苯（CW / DVB）萃取纤维）和SPME-HPLE联用接口（美国Supelco公司）；LD4-2A低速离心机（北京医用离心机厂）；JJ-2组织捣碎匀浆机、SK-1快速混匀器（常州国华电器有限公司）。
1.2试剂
   乙腈为色谱纯（天津市华真特种化学试剂厂）；实验用水为二次蒸馏水，经0.45μm滤膜过滤；醋酸为分析纯（天津市医药公司）。
速灭威（纯度98 %）和乙霉威（纯度98 %）标准溶液的配制：分别称取各102 mg，用甲醇溶解，定溶于100 mL容量瓶中，制得1.0 mg / mL速灭威和乙霉威标准储备液，贮存于4℃冰箱中。
   条件优化中混合标液的配制：分别取速灭威储备液2500μL乙霉威储备液500μL于250mL容量瓶中，用水稀释至刻度。
1.3实验方法
   使用新的SPME萃取纤维前，萃取纤维需在流动相中冲洗直至无干扰峰出现；旧的SPME萃取纤维在每次使用前在流动相中冲洗20 min。准确移取4.00 mL样品溶液于萃取瓶中，在室温下用60 μm PDMS / DVB直接萃取40 min，搅拌速度为1100 r / min。然后萃取纤维在解吸室内静态解吸6 min，之后进行HPLC分析。
   色谱条件：流动相为乙腈和水（体积比为55︰45）；流速为1.0 mL / min；210 nm 检测；利用保留时间定性，峰面积定量。

2 结果与讨论
   本实验对固相微萃取条件，萃取纤维、萃取时间、萃取温度、搅拌速度、pH值进行了优化，最终选择最佳条件为：在室温下用60 μm PDMS / DVB直接萃取40 min，搅拌速度为1100 r / min。然后萃取纤维在解吸室内静态解吸6 min。实验结果见表1和表2。

3实际样品的分析
   按照实验方法对市售苹果按实验方法进行检测，未检出速灭威和乙霉威两种农药。

参考文献：
[1]Arther C, Pawliszyn J. Solid phase microtraction with thermal desorption using fused silica optical fibers[J].Anal Chem, 1990, 62(19):2145-2148
[2]Steffen A, Pawliszyn J. Analysis of flavor volatiles using headspace solid-phase microextraction[J].J Agric Food Chem,1996,44(8):2187-2193
[3]Clank J. Qualitative and quantitative analysis of flavor additives on tobacoo products using SPME-GC-MS[J]. J Agric Food Chem,1997,45(8):844-849
[4]肖柯，王勇，路鑫，孔宏伟，姚庆红，许国旺。固相微萃取-气相色谱/质谱测定工业废水中痕量有机物的研究[J].2003,21(1):76-80
[5]J.S.Aulakh, A.K.Malik, Varinder Kaur, Philippe Schmitt- kopplin. A review on solid phase microextration-high performance liquid chromatography (SPME-HPLC) analysis of pesticides[J].Anal Chem, 2005,35(1):71-85
[6]Wang Z, Hennion B, Urruty L, Montury M. Solid-phase microextraction coupled with high performance liquid chromatography: a complementary technique to solid-phase microextration-gas chromatography for the analysis of pestide residues in strawberries[J]. Food Additi and Contamin, 2000,17(11):915-923
[7]Falqui-Cao C, Wang Z, Urruty L, Pommier J J, Montury M. Focused microwave assistance for extracting some pesticide residues from strawberries into water before their determination by SPME/HPLC/DAD[J]. J Agric Food Chem, 2001,49(11) :5092-5097
[8]胡彦学，杨秀敏，王志，王春，赵锦。固相微萃取-高效液相色谱-荧光检测法测定番茄中的多菌灵和噻菌灵[J].色谱, 2005, 23 (6):581-584