自制填料对人血浆白蛋白的全色谱分离
赵彦鼎 杨博 李凯锋 陈学忠 刘萍 郭立安
(西安交大保赛生物技术股份有限公司, 陕西 西安710054)

   本文简要介绍了一系列自制填料对血浆白蛋白全色谱分离纯化技术。使用以交联琼脂糖凝胶为基质的阴阳离子交换和凝胶过滤填料，建立了一套比cohn法[1,2]简易的快速色谱方法，对血浆白蛋白进行分离纯化。同时对所开发填料的使用性能予以评价。

材料与方法
填料及色谱柱
    使用西安交大保赛生物技术股份有限公司生产的以交联琼脂糖微球为基质的弱阴离子交换填料DEAE Bio-Sep FF、弱阳离子交换填料CM Bio-Sep FF和凝胶过滤填料Bio-Sep 6FF。色谱柱采用自制不同规格玻璃柱并经过硅烷化处理。

1. 纯化过程色谱图（图1、图2、图3）
2. 纯化结果
    图4为纯化过程中各组分凝胶电泳图。用高效液相色谱（HPLC）法测定组分Ⅲ—1样品中白蛋白的含量（见图5），结果求得，经过三步层析分离所制备的产品，其白蛋白与白蛋白二聚体的含量为98.44%。该指标与市售商品白蛋白纯度相比较，已完全达到乃至超过后者。
    用考马氏亮兰染料结合法测定蛋白浓度，经计算求得白蛋白的回收率为91.4%。检测表明，经过第四步色谱分离后，白蛋白的纯度已接近100%。

参考文献：
[1] Cohn E J, strong, L E, Hughes W L, et al. Preparation and properties of serum and plasma proteins (Ⅳ) A system for the separation into fractions of the protein and lipoprotein components of biological tissues and fluids. J Amer. Chem. Soc, 1946, 68: 459
[2] Oncley J L, Melin, M, Richert D A, et al. The separation of antibodies, isoagglutinins, prothrombin, plasminogen, and β1-lipoprotein into subfractions of human plasma. J Amer. Chem. Soc, 1949, 71: 541