RP-HPLC法测定氢溴酸西酞普兰原料含量及有关物质
魏君 谢剑炜
军事医学科学院毒物药物研究所 北京 100850

    氢溴酸西酞普兰（Citalopram Hydrobromide）是一种新型抗抑郁药，该药是一种高选择性的5-羟色胺回摄抑制剂，1989年在丹麦首次批准上市，1998年美国FDA批准在美国上市，1999年获准在中国市场销售，为能严格控制本品纯度，本文建立了高效液相色谱法检查原料药中有关物质和含量，结果表明方法准确、简便，可有效的用于本品的质量控制。

1 仪器与试药
美国惠普HP1100型二元梯度泵高效液相色谱仪，附Chemstation化学工作站。氢溴酸西酞普兰及中间体（Ⅰ）5-氰基-苯酞、中间体（Ⅱ）4-（4`-氟-苯甲酰基）-3-羟甲基-苯氰、中间体（Ⅳ）4-[4-（二甲胺基）-1-（4`-苯基）-1-羟丁基]-3-羟甲基-苯氰以及反应物4-溴-氟苯均为本所合成，氢溴酸西酞普兰对照品经归一化法测定纯度大于99.5%，甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其他化学试剂均为分析纯。

2 方法和结果
2.1 色谱条件
   色谱柱为Zorbax SB-C18 250×4.6 mm，5 μm，流动相：甲醇∶0.1mol/L醋酸铵=60∶40 (0.1 mol/L醋酸铵液加三乙胺0.1%，用磷酸调pH至5.0)，紫外检测波长：240 nm，流速：1 .0ml/min，进样量20μl，柱温25℃，按氢溴酸西酞普兰计算理论塔板数为8865。
2.2 标准曲线的制备
   精称氢溴酸西酞普兰50 mg，溶于100 ml流动相中，得到0.5 mg/ml的氢溴酸西酞普兰标准液，分别精密量取1，3，5，7，9不同体积的标准液于25 ml量瓶中，稀释至刻度并摇匀，然后注射20 μl进入HPLC进行分析。以浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制工作曲线，线性范围在0.05～500 μg/ml呈良好线性关系，回归方程为: Y= 24.10+43.22X (r=0.9999)。
2.3 样品与中间体的分离度
   据合成路线，氢溴酸西酞普兰可能引入的杂质主要有中间体（Ⅰ）5-氰基-苯酞、中间体（Ⅱ）4-（4`-氟-苯甲酰基）-3-羟甲基-苯氰、中间体（Ⅳ）4-[4-（二甲胺基）-1-（4`-苯基）-1-羟丁基]-3-羟甲基-苯氰以及反应物4-溴-氟苯，取氢溴酸西酞普兰以及各中间体以流动相配制成一定浓度的混合溶液，进样分析，结果氢溴酸西酞普兰与各中间体的分离度均大于1.5，结果见图1。

图1 本品及各中间体HPLC分离图

2.4 最低检测限
   将氢溴酸西酞普兰及中间体（Ⅰ）5-氰基-苯酞、中间体（Ⅱ）4-（4`-氟-苯甲酰基）-3-羟甲基-苯氰、中间体（Ⅳ）4-[4-（二甲胺基）-1-（4`-苯基）-1-羟丁基]-3-羟甲基-苯氰以及反应物4-溴-氟苯的流动相溶液稀释进样，以基线噪音比为3作为检测限，经测定在选定的色谱条件下，氢溴酸西酞普兰检测限为1ng，其它中间体均为0.2 ng，反应物为4 ng。
2.5 精密度试验
   精密量取“含量测定”项下的样品溶液，连续进样5次，每次20μl，按峰面积计算，RSD为0.74%
2.6 稳定性试验
   精密量取“含量测定”项下的样品溶液，每天进样，连续进样7天，每次20μl，结果样品在7天内稳定，RSD为1.06%。
2.7 含量测定
   精密称取氢溴酸氢溴酸西酞普兰10 mg ，置25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即为0.4 mg/ml流动相溶液，取20μl注入液相色谱仪进行分析，结果见表1。

表1 样品含量测定结果（n=3）

3 讨论
3.1 流动相配比的影响 分别考察了甲醇(或乙腈)-磷酸盐（或醋酸胺）缓冲液、甲醇-乙腈-磷酸盐（或醋酸胺）缓冲液等体系及不同配比对色谱分离的影响，结果表明，磷酸盐缓冲液体系样品保留时间太长，甲醇-醋酸胺体系，增大甲醇用量，主峰保留时间缩短，减少甲醇用量，主峰峰形拖尾严重，加入0.1%三乙胺后，对峰形有极佳改善，主峰和杂质峰完全分离，为使分析时间和分离度同时达到最佳，选择流动相配比为甲醇:0.1 mol/L醋酸铵=60:40（0.1 mol/L醋酸铵加入0.1%三乙胺）。
3.2 pH值的影响 流动相pH值对色谱峰保留时间有一定影响，因为本品在酸性条件下较不稳定，实验选择流动相pH值为5.0。
3.3 检测波长的选择 氢溴酸西酞普兰经紫外吸收光谱扫描可知，本品在239±1nm处有最大吸收，本品及各中间体、降解产物在240nm处检出灵敏度均较高，故选择240 nm为紫外检测波长。

参考文献
1、ZHOU Hai-jun(周海均).Iternational Conference on Harmonidation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use,Quality Section(ICH药品注册的国际技术要求，质量部分)，Beijing(北京):People’s Medical Publishing House(人民卫生出版社)，2000.87
2、GhP（中国药典），2005.Vol II（二部）:Appendix（附录）VD.28