枳实中黄酮类成分差异与其红外光谱特征对比分析

                    刘振丽1 王淳1 宋志前1 李林福1 王跃生2*
     (1. 中国中医研究院基础理论研究所; 2.中国中医研究院中药研究所，北京 100700)

    枳实为常用中药，来源于芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙Citrus sinensis Osbeck 的干燥幼果。具有破气消积，化痰散痞的功效[1]。主要含有挥发油、黄酮类和生物碱类成分。其中的主要黄酮类成分为橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷和芸香柚皮苷。研究结果显示，根据主要黄酮类成分的种类不同可分为两种类型的枳实[2，3]，一种含有新橙皮苷和柚皮苷，而另一种不含有这两种成分。这种黄酮类成分的种类差异，是否会体现在红外光谱谱图上的差异，本文对此进行了研究。
1仪器、材料与试剂
    Spectrum GX型傅里叶变换红外光谱测定仪（Perkin Elemer公司）。FW80型微型高速万能试样粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）。HP1100高效液相色谱仪( G1322A脱气机，G1311A四元泵，G1316A恒温箱，G1315B DAD检测器，G1313A自动进样器，HP化学工作站)；LG0508理化干燥箱(上海市实验仪器总厂)。枳实为不同饮片厂产品及市售品。橙皮苷对照品(批号：0721-200010，含量测定用)、柚皮苷对照品(批号：110722-200309，含量测定用) 、新橙皮苷对照品由首都医科大学王英峰老师提供，枳实对照药材（批号：120936-200404） 购自中国药品生物制品检定所。甲醇、乙腈为色谱纯，KBr为分析纯,水为重蒸水，其它试剂为分析纯。
2 黄酮类成分分析
2.1 色谱条件 Zobax SB- C18 （4.6 mm×150 mm，5 m）色谱柱，流动相甲醇-2%醋酸（30:70）；流速1.0 mL•min-1；检测波长285 nm；柱温30 ℃。
2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取橙皮苷、柚皮苷和新橙皮苷对照品,加甲醇制成含量分别为 0.10 mg•mL-1、0.25 mg•mL-1和0.12 mg•mL-1的对照品溶液。精密吸取等体积的上述对照品溶液混合，得到混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取枳实粉末（过四号筛）0.1 g，精密称定，加入水饱和正丁醇溶液25 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用水饱和正丁醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，并定容于5 mL量瓶中，用微孔滤膜（0.45 m）滤过，取续滤液即得。
2.4 HPLC图谱分析 分别精密吸取各供试品溶液和混合对照品溶液5 μL注入液相色谱仪，得到各样品HPLC图谱。依据是否含有新橙皮苷、柚皮苷，分为两种类型的枳实，结果见表1。色谱图见图1。
3 红外光谱测定
3.1供试品的制备
    各饮片粉碎，过200目筛，取约1 mg-2 mg，加入约200 mg的KBr粉末，在研钵中研磨、混匀，转移到模具中，在低真空下压成透明的薄片（压力9.80 Gpa，4 min）。压片厚度1 mm-2 mm。
3.2 光谱测定结果
    光谱范围400 cm-14000 cm-1、DTGS检测器，分辨率4 cm-1、扫描次数15次，扫描时实时扣除水和CO2的干扰。各批次枳实红外光谱谱图与对照药材进行比较，相关性分析结果见表1。不同批次枳实饮片红外光谱测定结果图2。

4讨论
    试验结果显示，11个批次的枳实中有3个批次未检测到新橙皮苷和柚皮苷，
这3个批次枳实与枳实对照药材红外光谱谱图相关系数低于0.50，而另7个批次相关系数高于0.90。红外光谱谱图显示，两种枳实的主要差异来源于1200 cm-1-1500 cm-1间峰的数量与峰的强度不同。说明利用红外光谱谱图可以区分两种枳实，判断其中是否含有新橙皮苷和柚皮苷。
    中药是一复杂的混合物体系，但由于其所含化学成分的不同，各成分含量的比例不同，都会造成红外光谱谱图的差异。因此，可以通过红外光谱谱图的指纹性特征、峰（或谱带）形状特征对中药进行分类、真伪鉴定、质量评价和工艺监控[4,5]。

参考文献
[1] 中华人民共和国药典.2005年版一部.化学工业出版社.p172
[2] 赵宇，梁逸增，易伦朝，等。化学模式识别在中药枳实分类中的应用。现代中药研究与实践。2004；18（增刊）：70；
[3] 刘振丽,宋志前,张 玲,李林福,王跃生. 枳实饮片中3类化学成分含量测定。中国中药杂志，2006；31（17）：1425
[4] 孙素琴，周群，刘军，等。真伪半夏二维相关红外光谱法的鉴别研究。光谱学与光谱分析，2004，24（4）：427-430
[5] 黄昊，李静，秦竹，等。中药配方颗粒红外指纹图谱研究。分析化学，2003，31（7）：828-832。