流动注射化学发光法测定红果清除•OH的能力
                       回瑞华 侯冬岩 刘晓媛 唐蕊
                （鞍山师范学院 化学系，辽宁 鞍山 114007）

    红果为蔷薇科山楂属植物（Crataegus Pinnatifida Bunge var. major N.E.Brown）的果实。主要产于东北及华北。红果的皮色红，果肉厚，味酸甜，主要供健胃消食化积之用。红果内含有人体必须的氨基酸、多种脂肪酸、黄酮和糖类等成分。研究表明, 红果中的黄酮类成分可促使心血管扩张，冠状动脉血流量增加，产生降血压作用[1,2]。黄酮类化合物是一种天然的抗氧化剂,具有清除人体中超氧离子自由基抗衰老,增加机体免疫力的生理活性作用[3]。羟基自由基（•OH）是目前所知活性氧中对生物体毒性最强、危害最大的一种自由基，采用化学发光法筛选•OH清除剂已被广泛应用［4-5］。本文提出采用邻菲罗啉—Cu+—H2O2化学发光体系，并结合流动注射技术研究红果的清除•OH的能力。该方法具有灵敏度高，操作简单、快捷等优点，
1. 实验部分
1.1仪器与实验材料
IFFM-D型流动注射化学发光仪(西安瑞迈电子科技有限公司)；pHS-3C精密数显酸度计(上海天达仪器有限公司)；微量移液器(上海求精生化试剂仪器有限公司)；邻菲罗啉(沈阳市试剂三厂，4.0×10-4 mol/L)，氯化亚铜(天津市化学试剂一厂，1.0×10-4 mol/L)，过氧化氢(沈阳第一试剂厂，0.27mol/L)，碳酸盐缓冲液(pH10.57)；红果样品：2003年10月采自辽宁本溪山区。选用充分成熟，无病虫害的果实，用清水将果实洗净，去果蒂、果柄及果核，晾干。
1.2样品处理
1.2.1用60%乙醇作溶剂：称取粉碎的红果样品(0.425mm)1.00克，固液比1：12，超声提取时间30min，温度0℃。旋转蒸发除去乙醇，定容至50ml，即得20mg/ml的待测溶液。
1.2.2用水作溶剂：称取粉碎的红果样品(0.425mm)1.00克，固液比1：25，提取时间30min，温度室温，过滤，定容至50ml，即得20mg/ml的待测溶液。
1.3实验条件
按图1所示连接仪器，以水为空白，测定不同浓度红果对HO•的清除率。
                   清除率=（I0-I）/ I0 ×100%
2.结果与讨论
    由实验可看出，红果的60%乙醇和水的提取溶液都具有一定的清除•OH能力，测定结果如图2，从图中可看出它们的IC50(清除率为50%时的溶液的浓度)分别为0.049mg/ml，0.066mg/ml，可知红果生的60%乙醇的提取溶液具有更强的清除•OH能力。

参考文献：
[1] 王月刚,陈素云. 山楂对心血管系统的药理作用研究[J].中医药信息, 2000,6: 29—30
[2] 王丽先.山楂治疗高脂血症31例临床观察[J].陕西中医学院学报, 2000,23: 34
[3] 叶璐君,杨师尧编著.山楂的保健功能与食疗方[M].北京: 金盾出版社, 20001—4
[3] 陈季武,胡天喜.测定OH产生与清除的化学发光体系［J］.生物化学与生物物理进展,1992,19(2):136.
[4] 唐蕊1，2,侯冬岩2，1,回瑞华2，1.用一种新的流动注射化学发光法测定槐叶和槐米清除•OH的能力. 鞍山师范学院学报,2005,12,7(6):64 -67