环烯醚萜总苷对糖尿病大鼠肾小球硬化影响的SEM观察
                       张中朝¹， 栗华¹， 王超²， 张会欣²
           （河北省疾控中心1慢病所，2药研所， 河北 石家庄 050021）

    摘要：环烯醚萜总苷（简称HXMTZG）是中药山茱萸的提取物，近年来的研究表明，HXMTZG能有效地减少糖尿病大鼠肾小球皮质中晚期糖化终产物（AGEs）的表达，改善晚期糖尿病肾病的临床症状。我们应用扫描电子显微镜对此进行了研究，结果表明中药山茱萸及其提取物HXMTZG能显著地减少糖尿病大鼠肾小球的玻璃样改变，具有保护肾脏，延缓AGEs的产生和堆积的作用，对糖尿病的临床治疗有一定的指导意义。
关键词：山茱萸；环烯醚萜总苷；糖尿病肾病; 糖化终产物
中图分类号：R282.71 R284.1 R587.240.5                   文献识别码：A

    糖尿病晚期的并发症糖尿病肾病是一种严重的疾病，临床治疗有一定的困难。研究发现糖尿病肾病的病理改变是肾小球广泛玻璃样改变导致肾功能丧失，玻璃样变的基本物质为糖蛋白，称糖化终产物（AGEs）。因此， 探讨AGEs发生、发展的原理就成了人们关注的问题。近年来的研究表明，中药山茱萸的提取物HXMTZG能有效地减少糖尿病大鼠肾小球皮质中晚期AGEs的表达⑴，改善晚期糖尿病肾病的临床症状。本实验应用SEM研究中药山茱萸及其提取物HXMTZG对大鼠肾小球内皮细胞超微结构的影响，以全面了解HXMTZG的作用机理。
    1 材料和方法
    1．1材料 a.实验动物及分组 取SD大鼠30只（本中心实验动物研究室提供），随机分为正常组，治疗组，对照组三组。每组10只，雌、雄不分，体重180-220克。
    b.仪器与试剂 （1）仪器 BX40光镜，日本OLYMPUS公司；JEM1200EX电子显微镜带扫描附件，日本JEOL公司；HLP-2临界点干燥仪，日本HITACHI公司；NOVA超薄切片机，瑞典LKB公司；中科显微图像分析仪。（2）试剂 链脲佐菌素（STZ），美国SIGMA公司; 环烯醚萜总苷（HXMTZG）, 江苏省中康指文图谱有限公司。
   1．2方法 a.模型制备 正常组，治疗组，对照组三组均采用常规饲料喂养，治疗组、对照组一周后一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ，SIGMA公司）60mg/Kg，诱导大鼠糖尿病肾病模型。6周后检查大鼠血糖、尿肌酐、尿蛋白，确定达到大鼠糖尿病肾病模型要求。然后，治疗组在正常饲料中加添HXMTZG150mg/Kg继续喂养12周。之后将三组的大鼠全部断头杀死，取双肾4%戊二醛固定，4度冰箱冷藏静置待用。
    b.样品制备 分三组 1）光镜组 常规甲醛固定，脱水，包埋，切片，染色，光镜观察。 2）透射电镜组 4%戊二醛固定，漂洗，1%锇酸固定，梯度酒精脱水，醋酸铀染色，树脂包埋，切片，铅染色，干燥，送透射电镜观察。3）扫描电镜组 4%戊二醛固定，漂洗，1%锇酸固定，梯度酒精脱水，醋酸异戊脂置换，临界点干燥，喷金，送扫描电镜观察。
2 结果
    肉眼观察，大鼠肾赃色泽较暗，体积较正常组大；光镜下观察，可见对照组大鼠肾赃皮质肾小球广泛硬化，透明质形成，肾小球系膜增宽，肾小管基底膜增厚，有大量基底细胞、炎细胞增生。治疗组大鼠肾小球球体和系膜区面积较对照组增加，未见明显的肾小球硬化。透射电镜下观察可见治疗组大鼠肾小球球体和系膜区面积较正常对照组增加，未见明显的肾小球硬化。扫描电镜下，对照组大鼠肾小球广泛硬化，球体和基底膜间隙消失，球体呈玻璃样变，失去球体的基本结构，系膜明显增厚，肾小管结构不清，呈玻璃样改变。治疗组可见肾小球和基底膜间隙正常，肾小球球体结构清晰。 。
3 讨论
近年来的研究表明，糖尿病肾病晚期肾小球硬化是糖尿病晚期患者死亡的主要原因之一，其主要病理变化为肾小管内皮细胞凋亡，玻璃样变，形成大量的晚期糖化终产物AGEs。目前认为，AGEs是通过细胞表面的特异性受体RAGE介导，趋化巨噬细胞，激活转录因子NFRB，刺激细胞因子和生长因子释放，上调基质蛋白的合成和分泌，淬灭一氧化氮等途径引起病变。ACEs具有不可逆性，可使肾小管上他皮细胞变性坏死、玻璃样变，在一系列细胞因子的作用下，引起广泛的蛋白质交联，使细胞刚性增加，弹性降低，细胞外基质增加，最终使肾小球早期失代偿性增大，滤过率增加；晚期则肾小球硬化，滤过率下降，肾功能丧失，可发生肾衰。
    国内有关专家针对以上问题进行了大量研究，发现许多中药可以改善肾小球硬化的状况，降低血糖、血脂的含量，抑制酯蛋白非酶基糖化，抑制脂质的过氧化，促进NO的生成，延缓肾小球基底膜的增厚，改善肾功能和临床症状⑵。中药山茱萸及其提取物HXMTZG在临床应用有明现的疗效。可改善临床症状和病人的部分生化指标⑶；实验研究表明HXMTZG能显著地减少糖尿病大鼠肾皮质内RAGE mRNA的表达，具有保护肾脏，延缓ACGe的产生和堆积⑷。本实验中，在光镜下可见治疗组大鼠肾赃皮质肾小球广泛硬化，透明质形成，肾小球系膜增宽，肾小管基底膜增厚，有大量基底细胞、炎细胞增生。透射电镜下观察，治疗组大鼠肾小球球体和系膜区面积较正常对照组增加，未见明显的肾小球硬化。扫描电镜下可见对照组大鼠肾赃皮质肾小球呈广泛玻璃样改变，基底膜增厚，球体结构消失；治疗组肾小球球体和基底膜结构清晰，未见明显的肾小球玻璃样改变，说明中药山茱萸及其提取物HXMTZG在减少糖尿病大鼠肾小球的病理改变方面有一定的作用。
4 结论
中药山茱萸及其提取物HXMTZG能显著地减少糖尿病大鼠肾皮质内RAGE mRNA的表达，具有保护肾脏，延缓ACGe的产生和堆积的作用，对糖尿病肾病的临床治疗有一定的指导意义。
参考文献
1． 许惠琴,刘洪,郝海平,等.中国药理学通报，山茱萸环烯醚萜总苷对糖尿病大鼠胸主动脉血管内皮细胞的保护作用[J].中国药理学通报，2003.19(6):13-5。
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3． 赵世萍,陈玉武,郭景珍,等. 山茱萸总苷的抗炎免疫抑制作用[J].中日友好医院学报,1996.10(4):295-8。
4． 黄黎明,梁恒,邢建宇,等. 山茱萸提取物对慢性肾炎小鼠的药理作用及蛋白质组学效应的实验研究[J].中国药理学通报,2004.20(10):1144-1150。

 Ultrastructural Observation on the charges of Diabetes Mellitus Rat’Renal 
        after Treated with HXMTZG for Scanning Election Microscope
          Zhang Zhong-chao， LIHua，WANG Chao，ZHANG Hui-xin，
（Institute of Chronic non-communidisease；Institute of Phramacology；Hebei Provice Center for Disease Provention and Control，Shijiazhuang，Hebei，050021 China）
Abstrust：HXMTZG is extracted from Eructus Comi。The studies in the recent years showwed，the HXMTZG can prove the symptom of the DM renal， and reduce the expression of the AGEs in the renal of DM Rat。We sduty this extract in SEM and the results demonstrate that the HXMTZG can reduce the charges as glass of the renal of DM Rat，defer that the AGEs to product and pile in the renal of DM Rat。The HXMTZG have meaning for the clinic treatment of DM。
Keyword：Eructus Comi；HXMTZG；AGEs； Diabetes Mellitus