高效液相色谱法检测吡啶甲基化氨基酸
                        衍生物的初步研究
                        宋宏涛 刘国平 张华明 魏洪源 罗顺忠 高晖
                中国工程物理研究院核物理与化学研究所，四川 绵阳，621900

    吡啶甲基化氨基酸衍生物具有优良的偶联配合性能，可以实现与金属核素的键合或作为双功能联接剂分子应用于生物分子的标记研究及其放射性药物的探索研究领域。
    鉴于高效液相色谱（HPLC）方法分离效能高、应用范围广、灵敏度高，可应用于新药的研究开发、杂质检查、物质鉴别、药品检验、生物样品的分析中。本文提出一种用于检测吡啶甲基化氨基酸衍生物（APPA为吡啶甲基化半胱氨酸；DPAA为吡啶甲基化甘氨酸；PADA为吡啶甲基化亚氨基二乙酸；HIPPA为吡啶甲基化组氨酸；PMBA为吡啶甲基化蛋氨酸）的HPLC方法。

    试验方法：本法采用实验室自动色谱分析仪和柱后衍生-紫外检测法。实验室自动色谱分析系统如图1所示。带有一只8μL流动池的紫外检测仪（DAD，Germany）与微机处理系统（Chemstation for LC systems，Agilent）相联接，通过色氨酸（Typ）内标法进行分析。所用色谱柱为XDB-C18，柱直径0.46 cm，柱长25cm。检测器波长选用300nm（各衍生物均在292～305nm之间出现吸收峰）。整个分析过程中，柱温均控制在25℃，时间控制为30min，洗脱液流速为0.800mL/min，洗脱液的组成和洗脱时间见表1。

    色谱柱无需再生，实验完毕后以淋洗液继续冲洗20min即可达到再平衡态。分析测定产生的柱后压力在73bar附近。

    结果讨论：由图2可见，我们选用的色谱柱和洗脱程序获得了较为理想的分析检测效果。各个分析测定过程所需时间略少于5min，本法检测灵敏度可达埃摩尔级（10-10mol），方法重现性较好(见表2)。

    目前，我们正在积极致力于探索HPLC方法与其他光（波）谱检测方法的相关联用技术，并将其用于检测分离金属配合物的系列研究中。