反相高效液相色谱法对 “假辣椒”中的碱性玫瑰精的分析研究
                        高会云1，蒋袆丽2，何娟1，刘德仓1，卢奎1
（1. 河南工业大学化学化工学院，郑州 450052; 2. 河南省产品质量监督检验院，郑州 450004）

    碱性玫瑰精是一种偶氮类工业染料，广泛地用于蚕丝、腈纶、羊毛、皮革、纸张等的染色。在我国被禁止用作食品添加剂，但由于碱性玫瑰精比食用色素更易于在食品上着色，且颜色较鲜艳，因此有一些不法贩子曾用碱性玫瑰精对海虾进行染色，前不久，在国内又发生了“假辣椒”事件，它是将玉米皮用碱性玫瑰精进行染色做成所谓的“辣椒粉”，欺骗了消费者。因此对“假辣椒”中碱性玫瑰精的快速检测也是当务之急。目前，报道的碱性玫瑰精的分析方法有：分光光度法[1]和高效液相色谱法[2-3]等，但分光光度法准确率较低，高效液相色谱色谱荧光检测法对检测器要求的较高，不易普及。我们采用反相高效液相色谱二极管阵列检测器对“假辣椒”中的碱性玫瑰精进行了分析研究，建立了简便、快速、灵敏的检测方法，可用于“假辣椒”中碱性玫瑰精的测定。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
    仪器：Agilent 1100高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器，四元泵，在线脱气；Shimadzu UV 2450紫外可见分析仪；瑞士BUCHI旋转蒸发仪；Sartorius BS210S型电子天平；UF-52超声波清洗器。
    试剂：碱性玫瑰精标准品，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。
1.2 色谱条件
    色谱柱：ODS C18 Hypersil（5μm，150 mm×4.6mm）；流动相：甲醇/水/乙腈= 60/25/15，(v/v/v)，加0.01%的三乙胺；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：545nm；进样量：10μL。
1.3 标准溶液的配置
    准确称取0.0500g碱性玫瑰精溶于250mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配成0.2mg/mL的标准溶液。分别从以上标准液中准确量取0.1mL，0.2mL，0.4mL，0.8mL，1.6mL至50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，得0.4μg/mL，0.8μg/mL，1.6μg/mL，3.2μg/mL，6.4μg/mL浓度的碱性玫瑰精标准溶液，配好的标准液经0.45μm滤膜过滤，上机检测。
1.4 样品预处理
    准确称取5.00g“假辣椒”置于250 mL具塞三角瓶中，加入100mL甲醇，于超声波清洗器上超声20min，过滤，收集滤液；残渣再加入80mL甲醇，超声20min，过滤，合并滤液。旋蒸后用甲醇定容至5 mL，经0.45μm滤膜过滤，上机检测。
2 结果与讨论
2.2 流动相和检测波长的选择
    实验中对流动相进行了试验，最后确定了使用甲醇/水/乙腈体积比为2/6/2作为流动相，并加入0.01%的三乙胺改善峰形。通过紫外可见分析仪确定545nm为碱性玫瑰精的检测波长。
2.3 线性范围和检出限
    碱性玫瑰精的溶液在0.4-6.4μg/mL范围内显示良好的线性。所得的线性方程为：Y=25.047X+11.204，R2=0.999，所得的标准曲线（图1），标准谱图（图2）：

2.4 样品提取溶剂的选择
    分别选择了乙醇，甲醇，水作为提取溶剂，对样品中的碱性玫瑰精进行提取，结果表明:以水为溶剂时，从基质中萃取的杂质较多，且提取率较低，而醇提效果较好，考虑到流动相用的甲醇，选择了甲醇作为提取溶剂。
2.5 加标回收率及精密度
    在空白的玉米皮中添加一定浓度的碱性玫瑰精，按样品前处理的方法进行处理，根据标准曲线进行定量，在添加水平分别为0.5μg/g，1.0μg/g和5.0μg/g时，加标回收率分别为85.08%，87.28%和84.56%；平行测定三次，RSD分别为3.36%，3.25%和2.89%。结果表明本方法的准确度和精密度良好。
2.6 实际样品分析
    在上述色谱条件下，精确吸取样品提取液10μL进样分析，得样品色谱图 (图3)。以外标法定量可计算出此“假辣椒”中所含的碱性玫瑰精的量为：1.1μg/g。

3 结论
    本方法对“假辣椒”中的碱性玫瑰精的检测具有
分析时间短，目标物仅需5min就可检测出；前处理简单，不需要固相萃取，基质对目标物的干扰较少；灵敏度高等优点。也不需要昂贵的检测器如荧光检测器就能对“假辣椒”中所含的碱性玫瑰精进行准确的定量分析，
能满足实际样品检测的要求。 图3“假辣椒”样品的色谱图

参考文献
[1] 崔兆瑞．示踪剂—碱性玫瑰精测试技术研究．中国环境检测，1990，6(2)：47-49
[2] 黄百芬．固相萃取—高效液相色谱荧光检测法测定染色虾米中的碱性玫瑰精含量．中国卫生杂志，2005，15(1)：17-19
[3] 王晓凤，杨惠芳，杜彩云．碱性玫瑰精的反相高效液相色谱分析．染整技术，1998，20(3)：36-37

该项工作由河南省重大科技攻关项目（0422031200）；郑州市科技攻关项目（064SGDG25127-8）；河南省攻关项目（0624470023）资助