羰基咪唑法固定化pH梯度毛细管等电聚焦
                     电泳用于蛋白质分离

                   谢瑶 耿利娜 徐建栋 屈锋 罗爱芹 邓玉林 
                北京理工大学 生命科学与技术学院 北京100081

摘要:在Hjerten 和Zhu[1]首次报道了毛细管等电聚焦（capillary isoelectric focusing, CIEF）的方法后，CIEF已被广泛应用于多肽及蛋白质等两性分子的的分离。通常，在自由溶液进行等电聚焦，样品中CAs的引入会带来检测波长受限及灵敏度降低等不足，因此，利用其它技术建立pH梯度的研究倍受关注，如整体柱型固定化pH梯度，电解水、热致pH梯度等[2-5]。
    羰基咪唑是一类具有广泛用途的蛋白质耦联剂，已在蛋白质及多肽高效液相色谱手性固定相的合成中得到了很好的应用[6]。本文在氨基化修饰的毛细管内引入N, N′-羰基二咪唑，以其为交联臂将两性电解质与毛细管壁进行化学耦联，反应原理如图1所示。在两性电解质（CAs，pH3-10）的固定化过程中，需要先对CAs进行等电聚焦，使其在毛细管内按等电点次序依次分开，再通过与羰基二咪唑的化学键合实现CAs的固定化。将所制备的固定化pH梯度毛细管应用到蛋白质等电聚焦分离，实验表明，血红蛋白(hemoglobin),牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)及胃蛋白酶（pepsin）三种蛋白质的混合样品获得良好分离,证明了该方法可行。

关键词：固定化pH梯度；毛细管等电聚焦电泳；蛋白分离；羰基咪唑法化学键合

参考文献
[1] S. Hjerte´n and M. D. Zhu. J. Chromatogr. 346: 265-270 (1985).
[2] C. Yang, G.. J. Zhu, L. H. Zhang, W. B. Zhang and Y. K. Zhang. Electrophoresis 25: 1729-1734 (2004).
[3] G. J. Zhu, H. M. Yuan, P. Zhao, L. H. Zhang, Z. Liang, W. B. Zhang and Y.K. Zhang. Electrophoresis 27: 3578-3583 (2006).
[4] L. H. Zhang, C. J. Zhang and X. Z. Wu. Anal. Sci. 22: 1039-1041 (2006).
[5] X. Z. Wu, L. H. Zhang and K. Onoda. Electrophoresis 26: 563-570 (2005).
[6] 李生京, 喻昕, 郑璟,等. 色谱，24(2): 114-116(2006).