新型2.3µm ODS色谱柱的性能评价及其在中药高通量分析中的应用

          张琳 罗丹1 潘明祥1 富泽洋2 桥本佳巳2 山崎浩行2 森山弘之2
          1，东曹达（上海）贸易有限公司技术服务中心 上海 200335

          2，东曹（日本）生命科学部

    一种新型可应用于高通量HPLC分析的 亚3微米ODS柱－TSKgel ODS-140HTP2.3µm被成功开发。实验考察了该种填料的基本性质和梯度下的色谱行为，并将该柱应用于中药样品的高通量分析。相比常规的5微米或3微米ODS柱，该柱在较宽的线性流速范围内均表现出很高的柱效；相比常规的亚2微米ODS柱，该柱在较宽的线性流速范围内柱压降较小，在乙腈/水的流动相体系下，该柱的柱压降仅为亚2微米的ODS柱1/2左右；在1.0mL/min的高流速下，色谱峰分离度未见有明显下降。实验结果表明，该种色谱柱除可配套用于超高压液相系统外，更可在常规HPLC系统压力下进行高通量HPLC分析。

1. 实验部分
1.1 仪器和主要试剂
ACQUITY UPLCTM (美国Waters)，HLC 8020高效液相色谱仪(日本Tosoh)，甲醇 （德国Merck），乙腈（德国Merck），其它试剂均为AR级。
1.2 色谱条件
色谱柱：TSKgel ODS-140HTP 2.3µm (2.1 mmI.D. x 5 or 10 cm)、TSKgel ODS-100V 3µm (4.6 mmI.D.x 15 cm)、Acquity BEH C18 (2.1 mmI.D.x 5 cm or 10 cm), Zorbax Eclipse C18 (2.1 mmI.D.x 5 cm or 10 cm)、Hypersil Gold C18 (2.1 mmI.D.x 5 cm)
2. 结果与讨论
2.1 基本性质考察 实验比较了TSKgel ODS-140HTP 2.3µm色谱柱和3种亚2微米ODS色谱柱的Knox曲线。结果表明，在考察线性流速范围内，TSKgel ODS-140HTP 2.3µm色谱柱和3种亚2微米色谱柱的Knox曲线非常近似，说明新型2.3µm的ODS填料的色谱柱其装填效果较好。不同流速下的柱效考察结果表明，该色谱柱在接近1 mL/min的流速下仍可保持较高的柱效，说明该柱可用于高流速下的快速分析。不同流速下的柱压变化的比较结果表明，在相同的流速条件下，TSKgel ODS-140HTP 2.3µm色谱柱的柱压降仅相当于亚2微米ODS柱的二分之一到三分之一。与3微米ODS柱的分离结果比较表明，该色谱柱在更高流速下进行更快速分析，分离度未有明显下降。1100次梯度运行实验前后色谱柱的柱效比较结果表明，该色谱柱具有很好的使用寿命。
2.2 梯度色谱行为考察 分别在相同的梯度分析时间和在相同的梯度体积下，使用不同流速的进行分离实验，结果比较表明，采用TSKgel ODS-140HTP 2.3µm色谱柱可以在更高的流速下进行快速分析，分离度未有明显下降。
2.3 应用 分别采用5 cm和10 cm柱长的TSKgel ODS-140HTP 2.3µm色谱柱对中药白首乌总提物样品进行分离实验，并在色谱柱上限压力下和相同的梯度体积的条件下与5 cm和10 cm柱长的1.7µm ODS色谱柱进行了对比分离实验（图1，图2）。实验结果表明，TSKgel ODS-140HTP 2.3µm色谱柱可以在更快的流速和更低的柱压降的条件下进行中药样品的高通量分析。对中药西南文殊兰总提物样品的分离实验表明，相比 3微米ODS柱，采用TSKgel ODS-140HTP 2.3µm色谱柱分析可以获得更快的分离速度和更高的检测灵敏度。