蛋白质在PEG/盐双水相体系中的分配行为研究

                         覃浩 董敏 刘松南 屈锋* 邓玉林
                 北京理工大学生命科学与技术学院 北京 100081

    双水相萃取技术是新型的液液萃取技术。两种水溶性物质（盐和聚合物或者两种聚合物）在溶液中达到一定浓度后可形成互不相溶的双水相。整个体系不包含有机溶剂，因此特别适用于蛋白质，核酸等生物大分子的分离。温和的分离条件保证了生物分子在分离过程中不丧失活性，并具有分相时间短，环境毒害低，易于放大，易于连续操作等优点。
    本实验以高效液相色谱为分析手段，研究五种蛋白质（溶菌酶、细胞色素C、牛血清白蛋白、肌红蛋白、胰蛋白酶）在不同双水相体系中的分配，探讨盐种类和浓度，聚合物种类和分子量以及pH等因素对蛋白质在双水相体系中分配的影响。 研究结果表明，在15%（w/w）PEG4000与14%（w/w）磷酸盐组成的双水相体系中，细胞色素C，牛血清白蛋白主要分配在下相，而溶菌酶，胰蛋白酶与肌红蛋白则在上下两相中都有分配（图1）。 固定体系中PEG浓度为15%，随磷酸盐浓度从12%增加到18%时，蛋白质在上下相呈现不同分配比。随盐浓度的增加，下相蛋白质浓度呈下降趋势，而上相浓度变化不大（图2）。在15%PEG4000/12%磷酸盐双水相体系中，部分蛋白质在下相浓度明显高于上相。 蛋白质在PEG/硫酸铵体系中有不同的分配行为，溶菌酶主要分配在下相。

致谢: 本课题得到国家“973”计划(2007CB914101),国家自然科学基金(No. 20275043; No.20377046)资助.

参考文献
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[2] A. Salabat, M.H. Abnosi, A.R. Bahar, Amino acid partitioning in aqueous two-phase system of polypropylene glycol and magnesium sulfate. Journal of Chromatogr. B, 2007, 858, 234-238.