胍基型蛋白折叠色谱固定相的制备

                           周恺 高栋 白泉 耿信笃
    西北大学现代分离科学研究所，现代分离科学陕西省重点实验室，陕西 西安，710069

摘要：蛋白质复性是制约生物工程产业化的技术瓶颈，如何提高还原变性蛋白在折叠过程中二硫键的正确对接率，对蛋白药物的纯度和产率的提高及生物工程技术的发展具有非常重要的意义，这亦是研究蛋白折叠的关键问题之一。蛋白折叠液相色谱法(protein folding liquid chromatography，PFLC)是近十几年来迅速发展起来的一种新的复性方法，已成为蛋白折叠研究的重要工具。其中，固定相的表面性质对变性蛋白的正确折叠起到关键作用，流动相则辅助蛋白的折叠。人工分子伴侣近年来研究较多，其作用类似于分子伴侣，具有抑制变性蛋白质分子间的疏水性相互作用，可以促进蛋白质的复性。若将色谱技术与人工分子伴侣两者的优势结合起来，即将人工分子伴侣键合到色谱固定相上，则可以体现明显的优势：首先复性过程中能够得到高浓度的蛋白；其次变性剂的去除步骤可以省略，可以大大节约操作成本；最后还可以对固定相进行重复利用。为此我们将具有人工分子伴侣性质的精氨酸及其类似物键合到色谱基质上制备出人工分子伴侣蛋白折叠色谱固定相，以寻求提高蛋白复性效率的新方法。本文主要探讨了色谱固定相的合成方法以及模型蛋白的色谱行为。合成路线及标准蛋白的色谱分离图见图1和图2。从图2可以看出该填料具有典型的阴离子交换作用，并且对标准蛋白具有很好的分离效果。