蛋白含量与紫外-可见光检测器的高效液相色谱峰
                    面积之间的关系

           史新昌 韩春梅 罗立骏 李响 刘兰 丁有学 饶春明*
            中国药品生物制品检定所生化室 北京 100050

摘要: 推导出紫外-可见光检测器高效液相色谱图峰面积与蛋白含量之间的关系式,指出公式成立的前提，并对公式及其前提进行部分检验；通过理论推导得出谱图峰面积与蛋白含量之间的关系式，在以下三方面检验公式及其成立前提。（1）用紫外-可见光分光光度计测定L-色氨酸溶液250nm～350nm最大吸收波长和该波长下的吸收值（A），同一溶液用不接色谱柱的高效液相分析，通过转换公式：吸收值（A）=流速（v）×峰面积（S）/上样体积（V），计算在某波长下吸收值（UV-HPLC），进而计算与测量值（UV）之比百分数，得到回收率。（2）通过pH值、NaCl浓度和乙腈浓度变化来检验白蛋白最大吸收波长和该波长下消光系数的稳定性。（3）估计SEC-HPLC系统误差；推导所得公式为：蛋白含量（C）=流速（v）×峰面积（S）/蛋白消光系数（ε）/样品池长（ρ）/上样体积（V），公式成立前提：其一为系统误差可忽略不计；其二蛋白消光系数可视为不变。当高效液相流速在0.8ml•min-1～1.0ml•min-1之间、上样体积在20μl～100μl范围内色氨酸溶液回收率约为100%。当溶液pH值在4.0～8.6之间、NaCl浓度在2 mol•l-1以下时，白蛋白消光系数和最大吸收波长稳定，但乙腈浓度在50%以下时，白蛋白消光系数最大有约5%的增加。SEC-HPLC分析白蛋白的重复性相对标准差均小于1%，各蛋白上样量36.5ng、29.2 ng、21.9 ng、14.6ng和7.3 ng试验点的相对标准差分别为0.6%、0.7%、1.0%、1.4%和2.7%； 该公式在特定条件下成立，可用于指导含有吸光干扰物质的蛋白样品高效液相色谱法蛋白含量测定。

关键词：高效液相；紫外-可见光检测器；蛋白含量；流速；峰面积；消光系数；样品池长；上样体积

参考文献
1. ChP （中国药典）.2005 Vol Ⅲ（三部）.Appendix(附录) Ⅵ B
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3. Paul CH.（周祖康等译） Principles of Colloid and Surface Chemistry（胶体与表面化学原理）.187-243.
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