新型药物蛋白靶点筛选方法的研究

                 于晓明 赵鹏 梁振 张丽华* 张维冰 张玉奎
   国家色谱研究分析中心，中科院大连化学物理研究所，大连市中山路457号，116023

    药物蛋白靶点分析对于研究药物作用机制、评估药物安全性以及进行新药研发具有重要意义。在近期研究中，以噬菌体展示文库和肝脏蛋白组为研究对象，发展了基于噬菌体展示cDNA文库和化学蛋白组的药物蛋白靶点筛选方法。

   建立了以键合药物的琼脂糖凝胶为固相载体的T7噬菌体展示cDNA文库的筛选方法；经过多轮亲和筛选，富集到与氨甲蝶呤存在特异性相互作用的展示人磷脂酰肌醇3-激酶相关蛋白激酶SMG-1的噬菌体。发展了以键合药物的聚丙烯酰胺凝胶整体材料为固相载体的T7噬菌体展示cDNA文库筛选。经过5轮筛选富集到与阿霉素相互作用的展示人甲基化CpG 结合蛋白的噬菌体；通过药物在键合阳性噬菌体的聚丙烯酰胺冷凝胶上的吸附和解吸行为研究，证实药物与阳性噬菌体克隆之间存在亲和作用。 针对水溶性差的药物，发展了以药物分子聚合体直接作为固相载体进行文库筛选的策略；以地塞米松作为目标药物分子，经过四轮亲和筛选富集到展示白蛋白和细胞色素C氧化酶III亚单位的噬菌体；利用毛细管电泳前沿分析方法测定了地塞米松与白蛋白的结合常数，验证了筛选方法的可行性。

    以键合药物配基的琼脂糖凝胶为亲和基质，发展了基于亲和色谱的化学蛋白组学方法，并用于发现动物肝脏组织中与药物分子有特异性相互作用的蛋白。探讨了不同洗脱方法对富集蛋白的解吸效果，以及不同除盐模式对蛋白鉴定的影响；并通过RPLC-MS鉴定出小鼠肝脏中31个与氨甲蝶呤可能有特异性相互作用的蛋白质。